毛冬青膠囊中具棲冬青苷和毛冬青酸的藥代動力學(xué)研究.pdf

1、毛冬青膠囊屬于中藥制劑，由冬青科毛冬青的干燥根提取而成，臨床廣泛用于冠狀動脈硬化性心臟病、心絞痛、血栓閉塞性脈管炎等疾病治療，療效確切。三萜皂苷類是毛冬青根中的主要活性成分，毛冬青酸是毛冬青皂苷類在體內(nèi)的主要代謝產(chǎn)物之一。目前毛冬青的研究以毛冬青皂苷甲、毛冬青皂苷B1、B2及冬青素為多，且綜觀文獻(xiàn)，研究單位以廣州中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院為主，實(shí)驗(yàn)使用的標(biāo)準(zhǔn)品均由單位自制。以文獻(xiàn)中明確的毛冬青有效成分為基準(zhǔn)篩選課題研究對象，并結(jié)合所選成分市面是否

2、有售，本課題最終確定具棲冬青苷和毛冬青酸作為研究對象。目前，毛冬青膠囊以其中不含有的蘆丁為質(zhì)控指標(biāo)，既不合理可不科學(xué)，本文試圖在現(xiàn)有研究的基礎(chǔ)上，對毛冬青膠囊中這兩種成分的藥物代謝特性展開研究，旨在為生產(chǎn)廠家質(zhì)量控制、臨床用藥及后續(xù)的科學(xué)研究提供參考依據(jù)。建立HPLC法同時(shí)測定毛冬青膠囊中具棲冬青苷和毛冬青酸含量的方法，并對3個批次毛冬青膠囊中上述兩種化合物進(jìn)行定量分析。實(shí)驗(yàn)采用C18色譜柱，規(guī)格:4.6mm×150mm，粒徑5μm;甲

3、醇與0.2％磷酸以1.0 mL·min-1走梯度進(jìn)行洗脫，215 nm檢測，檢測體積20μL。結(jié)果表明具棲冬青苷和毛冬青酸的線性范圍分別為1.2188～521.13μg· mL-1(r=0.9995)，1.2258～289.62μg·mL-1(r=0.9991)，加樣回收率分別為99.24％(RSD0.68％)、99.53％(RSD0.85％)。該方法簡便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可為毛冬青膠囊提供質(zhì)量控制依據(jù)。建立測定具棲冬青苷、毛冬青酸血藥

4、濃度的方法，并測定其大鼠體外血漿蛋白結(jié)合率。采用高效液相色譜法和平衡透析法測定具棲冬青苷、毛冬青酸在大鼠體外血漿中的血漿蛋白結(jié)合率。結(jié)果表明低、中、高3種質(zhì)量濃度，具棲冬青苷在大鼠體外血漿中的蛋白結(jié)合率分別為(39.72％±2.68％)，（52.05％±3.35％）和（52.32％±0.76％）;毛冬青酸在大鼠體外血漿中的蛋白結(jié)合率分別為（55.18％±3.66％），（60.79％±2.20％）和（47.00％±1.59％）。建立HPL

5、C法對具棲冬青苷和毛冬青酸進(jìn)行分離，方法簡便。體外實(shí)驗(yàn)，具棲冬青苷和毛冬青酸與大鼠血漿屬中等結(jié)合型藥物，且蛋白結(jié)合率與藥物濃度無關(guān)。
　　探討尾靜脈推入具棲冬青苷后大鼠體內(nèi)藥代動力學(xué)。建立血漿中具棲冬青苷的LC-MS測定法，檢測大鼠尾靜脈給予具棲冬青苷（2.86mg/只）后血藥濃度，使用DAS Ver1.0軟件統(tǒng)計(jì)并分析其藥代動力學(xué)參數(shù)。發(fā)現(xiàn)具棲冬青苷進(jìn)入大鼠體循環(huán)的分布遵循二室模式，重要參數(shù):CL=51.07 L·h-1，t1/

6、2β=5.20 h，Cmax=22.68μg·L-1，Vd=2355.69 L。本方法靈敏度高，可用于大鼠血漿中具棲冬青苷的檢測及藥代動力學(xué)分析。
　　探討毛冬青膠囊進(jìn)入體內(nèi)正常代謝時(shí)對大鼠CYP1A2、2C6、2D1、2D2、2E1、3A2的變化，用雞尾酒的方法。實(shí)驗(yàn)分別以茶堿、咪達(dá)唑侖、甲苯磺丁脲、奧美拉唑、右美沙芬和氯唑沙宗作為探針底物，全部大鼠分3組（要求隨機(jī)）:空白對照、低和高劑量。給藥組每天灌胃給予毛冬青膠囊，低量組每

7、只0.45 g，而高量組每只0.9 g，空白組給予生理鹽水，劑量與實(shí)驗(yàn)組相同，3組均1次/天，共14天。給藥結(jié)束次日早上灌胃Cocktail探針?biāo)幬?，給藥前采空白血，給藥后不同時(shí)間點(diǎn)采血，用LC-MS/MS檢測各探針?biāo)幬锏难帩舛龋?jì)算藥動學(xué)參數(shù)。結(jié)果數(shù)據(jù)表明:茶堿低劑量組Cmax、AUC0-t有極顯著差異(P≤0.01);高劑量組甲苯磺丁脲AUC0-t差異明顯，氯唑沙宗低劑量組同參數(shù)差異也顯著，且P≤0.05;其他統(tǒng)計(jì)學(xué)無差異。毛冬青