遼寧堿蓬SINAC6、SINAC7基因克隆及功能分析.pdf

1、分類號：密級學(xué)校代碼：學(xué)號：10165201211001067遣掌研筢大學(xué)碩士學(xué)位論文⑨遼寧堿蓬SINAC6、SINAC7基因克隆及功能分析作者姓名：學(xué)科、專業(yè)：研究方向：施鶴植物學(xué)植物分子生物學(xué)與基因工程導(dǎo)!J幣姓名：李秋莉教授2015年03月遼寧師范大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要NAC轉(zhuǎn)錄因子在植物的生長發(fā)育，抵抗干旱、高鹽、低溫、損傷、病毒，以及其它生理過程中起著重要的調(diào)控作用。遼寧堿蓬是一種鹽生植物，有大量的耐鹽基因待研究。本論文以實(shí)驗(yàn)室

2、前期獲得的遼寧堿蓬的兩個(gè)NAC轉(zhuǎn)錄因子(命名為SINAC6、SINAC7)的EST序列為對象，進(jìn)行了基因克隆和功能研究。RACE技術(shù)獲得了SlNAC6、SINAC7eDNA全長序列，SINAC6eDNA1301bp，GenBank登錄號為KR002106，編碼353個(gè)氨基酸，GenBank登錄號為l氓002106；SINAC7eDNA1863bp，編碼573個(gè)氨基酸，GenBank登錄號為KR002107。多重序列比對及進(jìn)化樹分析表明，

3、SINAC6屬于ONAC003亞家族，SINAC7屬于ANAC01l亞家族。實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)分析兩個(gè)轉(zhuǎn)錄因子基因的表達(dá)特性。SINAC6與SINAC7在遼寧堿蓬的根、莖、葉中均有表達(dá)，葉中表達(dá)量較高。SINAC6、S1NAC7響應(yīng)鹽、低溫、干旱和ABA脅迫。酵母單雜交分析結(jié)果顯示，SINAC6、SINAC7及SINAC6的C端、SINAC7的C端均具有轉(zhuǎn)錄激活活性，而保守的N端均不具有轉(zhuǎn)錄激活活性。推測SINAC6、SINAC7是轉(zhuǎn)錄

4、因子，轉(zhuǎn)錄激活域在C端?；驑屴D(zhuǎn)化法分別將SINAC6GFP、SINAC7GFP融合蛋白轉(zhuǎn)化至洋蔥表皮細(xì)胞，結(jié)果顯示，SlNAC6GFP、SINAC7GFP融合蛋白分布于細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)中，推測分布于細(xì)胞核中的SINAC6、SINAC7是轉(zhuǎn)錄因子，在核內(nèi)行使轉(zhuǎn)錄因子的功能，分布于細(xì)胞質(zhì)中的SINAC6、SINAC7可能具有其他功能。蘸花法分別將SINAC6與SINAC7轉(zhuǎn)化擬南芥，獲得純合的轉(zhuǎn)基因擬南芥。對轉(zhuǎn)基因擬南芥進(jìn)行非生物脅迫處理，