鹽地堿蓬SsNHX1基因及擬南芥AtNHX1、AtNHX5基因的功能分析.pdf

1、　　本實(shí)驗(yàn)利用植物表達(dá)載體pROKⅡ和農(nóng)桿菌GV3101將SsNHX1(全長(zhǎng)1665bp)、SsNHX2(N端缺失形式，缺失SsNHX1N端49個(gè)氨基酸，長(zhǎng)1530bp)、AtNHX1(全長(zhǎng)1614bp)及AtNHX5(全長(zhǎng)1554bp)基因在擬南芥中過(guò)量表達(dá)。在含40mg/L卡那霉素的培養(yǎng)基上篩選獲得SsNHX1和SsNHX2的純合轉(zhuǎn)化子，并對(duì)其進(jìn)行了分子鑒定和耐鹽性分析。因時(shí)間和工作量關(guān)系，只篩選到AtNHX1、AtNHX5的T1代

2、轉(zhuǎn)化子。SsNHX1和SsNHX2的純合轉(zhuǎn)化子的分子鑒定及耐鹽性分析結(jié)果如下：1.Southern雜交結(jié)果顯示，野生型植株(對(duì)照)沒(méi)有明顯的雜交信號(hào)，轉(zhuǎn)基因株系有強(qiáng)陽(yáng)性信號(hào)。表明SsNHX1、SsNHX2的確已經(jīng)整合到擬南芥的基因組中，但不同株系插入拷貝數(shù)不等。2.Northern雜交結(jié)果顯示轉(zhuǎn)基因植株均有雜交信號(hào)，表明插入擬南芥中的SsNHX1、SsNHX2已經(jīng)正常轉(zhuǎn)錄，但野生型擬南芥也有雜交信號(hào)，可能是內(nèi)源的AtNHX與SsNHX同

3、源性很高，探針與AtNHX結(jié)合的結(jié)果。不同轉(zhuǎn)基因株系雜交信號(hào)強(qiáng)弱不同，表明不同株系表達(dá)量不同。3.200mMNaCl處理下轉(zhuǎn)基因株系生長(zhǎng)情況好于野生型對(duì)照。但轉(zhuǎn)SsNHX1和SsNHX2的株系長(zhǎng)勢(shì)沒(méi)有顯著差異。4.測(cè)量不同濃度NaCl(0，100，200mM)處理后野生型和轉(zhuǎn)基因植株的干重、鮮重，結(jié)果表明脅迫下不同轉(zhuǎn)基因植株的干重、鮮重均高于對(duì)照，但轉(zhuǎn)SsNHX1和SsNHX2的株系干鮮重沒(méi)有顯著差異。5.測(cè)量不同濃度NaCl(0，10