新生鼠母嬰分離對成年后哮喘氣道炎癥的影響.pdf

1、目的：本實驗通過建立生命早期應(yīng)激模型（新生期母嬰分離，NMS）及哮喘雙模型，探討新生期母嬰分離對成年后哮喘氣道炎癥的影響及其機制，為臨床更好理解生命早期應(yīng)激事件與哮喘的關(guān)系奠定實驗基礎(chǔ);為提倡母嬰同室、家庭整體護理治療手段提供可靠依據(jù);也為后期預(yù)防應(yīng)激加重哮喘的治療提供新的策略。
　　方法：建立新生期母嬰分離模型，以Balb/c新生雄鼠為研究對象，隨機分成NMS組及非NMS組。仔鼠出生當(dāng)天作為PND0，NMS組在PND2～PND1

2、4，每天同時間段分離新生鼠及母鼠3h，而非NMS組不做分離處理。分別于PND21、PND28、PND35、PND42（即斷奶當(dāng)天、一周、兩周、三周）收集糞便，應(yīng)用變性梯度凝膠電泳(DGGE)技術(shù)檢測腸道菌群圖譜，并采用高效液相色譜法獲取腸道菌群代謝產(chǎn)物短鏈脂肪酸(SCFAs)的含量。在PND43采用雞卵清蛋白(OVA)致敏法建立哮喘模型。將非NMS組隨機分為正常對照組（A組）、哮喘組（B組），NMS組建立哮喘模型成為母嬰分離哮喘組（C組

3、）和短鏈脂肪酸喂養(yǎng)母嬰分離哮喘組（D組）。收集支氣管肺泡灌洗液(BALF)計數(shù)各組炎癥細胞總數(shù)及嗜酸性粒細胞(EOS)數(shù)目;HE染色觀察雄鼠肺組織病理變化;同時用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測雄鼠肺組織中細胞因子（IL-13、IL-25、IL-33）水平;蛋白質(zhì)免疫印跡法(Western blot)測定肺組織中Occludin和E-cadherin蛋白的表達。
　　結(jié)果：1.新生鼠母嬰分離后腸道菌群及SCFAs含量的變化:發(fā)現(xiàn)

4、斷奶后一周、兩周、三周NMS組雄鼠腸道菌群DGGE圖譜的條帶數(shù)S'、多樣性指數(shù)H'和優(yōu)勢度指數(shù)D'均低于非NMS組(P＜0.05)，而斷奶當(dāng)天兩組條帶數(shù)S'、多樣性指數(shù)H'和優(yōu)勢度指數(shù)D'無顯著統(tǒng)計學(xué)差異。高效液相色譜檢測發(fā)現(xiàn):NMS組和非NMS組間腸道中乙酸、丙酸含量不同，但無統(tǒng)計學(xué)意義;而非NMS組雄鼠腸道中丁酸的含量明顯高于NMS組，且差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。2.新生鼠母嬰分離后哮喘氣道炎癥的變化:C組雄鼠BALF中炎

5、癥細胞總數(shù)及EOS數(shù)目高于B組及A組，D組較C組有所減少(P＜0.05)。C組雄鼠肺組織HE染色可見肺間質(zhì)內(nèi)有較多以EOS為主的炎細胞浸潤;而B組及D組上述病理改變減輕，A組未見明顯變化。B組肺組織中細胞因子(IL-13、IL-25、IL-33)水平均明顯高于A組但低于C組，而C組高于D組，且差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義。3.新生鼠母嬰分離引起哮喘氣道炎癥變化可能存在的機制:C組雄鼠肺組織HE染色可見支氣管上皮杯狀細胞輕度增多，管腔內(nèi)有少量黏性

6、分泌物;而B組及D組上述病理改變減輕，A組未見明顯改變。Western blot顯示:B、C、D三組肺組織Occludin和E-cadherin蛋白的表達較A組明顯下降，其中C組蛋白表達水平低于B組，而D組高于C組，且差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)論：新生期母嬰分離可影響子代腸道菌群的多樣性并能降低腸道中丁酸的含量。新生期母嬰分離的雄鼠也可出現(xiàn)成年后哮喘氣道炎癥加重的現(xiàn)象，引起這一現(xiàn)象的機制可能是:生命早期腸道菌群多樣性的改變引起了