丙酮酸鈉-羥乙基淀粉復(fù)蘇對(duì)50％總體表面積燙傷大鼠腸道微血管通透性及腸屏障功能的影響.pdf

1、目的:臨床常采用晶膠液體結(jié)合的方式治療燒傷或膿毒癥及各種低血容量性休克，膠體液以血漿、白蛋白等天然膠體為優(yōu)選，由于血制品的獲取困難，羥乙基淀粉(hydroxyethyl starch HES)是常用的代血漿制品，以其快速、強(qiáng)效的擴(kuò)容效果廣泛應(yīng)用于臨床。但近些年國內(nèi)外均發(fā)現(xiàn)因輸入HES引起的嚴(yán)重不良反應(yīng)，因而關(guān)于是否繼續(xù)使用羥乙基淀粉等人工膠體及其優(yōu)劣性引起廣泛的爭論[1]。以往多項(xiàng)研究表明丙酮酸鈉具有抗酸、抗炎和抗氧化作用，能糾正多類休

2、克引起的糖代謝紊亂和酸堿失衡，保護(hù)臟器功能[2]。本研究目的是采用丙酮酸鈉作為羥乙基淀粉新的載體溶液應(yīng)用于休克復(fù)蘇，并與常用的氯化鈉和醋酸鈉林格液為載體的HES比較，確定丙酮酸鈉作為新的載體溶液是否能增強(qiáng)ES對(duì)血管內(nèi)皮的保護(hù)作用，在一定程度上拮抗或減輕HES的副作用，克服其他載體溶液的缺陷，減輕燒傷引起的血管滲漏和組織水腫，保護(hù)腸微血管通透性及腸屏障功能。
　　方法:
　　1、動(dòng)物模型雄性SD大鼠100只，體重220g-27

3、0g，購入后適應(yīng)性飼養(yǎng)1周。術(shù)前12小時(shí)禁食，4小時(shí)禁飲。戊巴比妥鈉(50mg/kg)腹腔注射麻醉，剪除頸、背部、臀和腹部毛發(fā)，無菌操作頸靜脈切開術(shù)置管，將大鼠放置在預(yù)制矩形泡沫模板的開口處，將裸露的皮膚浸在沸水中（100℃水浴，背部15秒，腹部8秒）造成50％總體表面積(TBSA)Ⅲ度燙傷。假燙對(duì)照組采用溫水浸泡(37℃水浴，背部15秒，腹部8秒)[36]。燙傷后將大鼠用特制的實(shí)驗(yàn)馬甲固定，連接靜脈給藥及采血輔助裝置后，放置于鼠籠中，

4、馬甲的萬向軸裝置能保證大鼠在持續(xù)輸液的同時(shí)在籠內(nèi)自由活動(dòng)。
　　2、分組與處理:燙傷后根據(jù)處理不同隨機(jī)分為:①假燙對(duì)照組(SC組，n=20)②燙傷不補(bǔ)液組（N組，n=20）;③丙酮酸鈉-羥乙基淀粉組(Pyr-HES，SP組，n=20)，、;④醋酸鈉林格液-羥乙基淀粉組(Ace-HES，SA組，n=20);⑤氯化鈉林格液-羥乙基淀粉組(Nacl-HES，SN組，n=20);每組根據(jù)觀察時(shí)間點(diǎn)不同又分燙傷后8h和24h兩個(gè)亞組(每個(gè)亞

5、組n=10)。各補(bǔ)液組均通過采用頸靜脈切開置管輸入，補(bǔ)液總量為0.75ml/kg×1％ TBSA（即1/2膠體補(bǔ)液公式），膠晶比例1∶1，12h輸完:前4h輸入總量的1/2為晶體醋酸鈉林格氏液，后8h輸入總量的1/2為各膠體液。均采用微量輸液泵嚴(yán)格按照計(jì)算所得輸液速度泵入
　　3、指標(biāo)檢測與方法:各組動(dòng)物于傷后8h和24h腹主動(dòng)脈取血，處死大鼠后取小腸組織放-80℃液氮凍存，用于下列指標(biāo)檢測:①取血前激光多普勒血流儀測定腸粘膜血流

6、量;②采用異流氰酸熒光素標(biāo)記葡聚糖檢測腸道微血管通透性;③干濕重法測定小腸組織含水率。④紫外分光光度計(jì)檢測血清中二胺氧化酶(DAO)活性;⑤用酶聯(lián)免疫吸附法小腸組織VEGF的變化;⑥免疫印跡(Western blot)和免疫熒光技術(shù)檢測腸組織中緊密連接蛋白(ZO-1)的變化。
　　結(jié)果:
　　1、腸黏膜血流量(IMBF):N組及各液體復(fù)蘇組傷后IMBF顯著低于SC組（P均＜0.05）;傷后8h(膠體液輸入后的4h)，SP組顯

7、著高于SA組和SN組(P＜0.05)，SA組優(yōu)于SN組(P＜0.05)，三治療組均高于N組(P＜0.05)。但在傷后24h，SP組和SA組無顯著性差異，兩組均高于SN組（P＜0.05）。N組在24h全部死亡。
　　2、異硫氰酸熒光素標(biāo)記葡聚糖(FITC-dextram):與SC組比較，N組以及各治療組傷后各時(shí)間點(diǎn)FITC-dextram含量均顯著增高(P＜0.05); SP組和SA組傷后各時(shí)間點(diǎn)FITC-dextram含量顯著低于

8、N組和SN組(P＜0.05); SN組優(yōu)于N組(P＜0.05); SP組低于SA組，但僅在8h差別有顯著性(P＜0.05）。24hN組在全部死亡，SP及SA組優(yōu)于SN組。
　　3、血清中DAO活性:各燙傷組DAO活性較SC組明顯升高，(P＜0.05)，SP及SA組較N組明顯降低，(P＜0.05)，SP組較SA組8小時(shí)顯著降低，(P＜0.05)。24hSP組和SA組顯著優(yōu)于SN組(P＜0.05)，SP組和SA組無無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

9、>　　4、小腸血管內(nèi)皮生長因子VEGF:較SC組，燙傷各組VEGF表達(dá)顯著增多(P＜0.05)，8h時(shí)間點(diǎn)SP組低于SA組和SN組(P＜0.05)。SA組優(yōu)于SN組(P＜0.05)，24hSP組和SA組間的差別尚無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但兩組均優(yōu)于SN組。
　　5、緊密連接蛋白ZO-1:(1)免疫印跡法分析，與SC組比較，燙傷各組在各時(shí)間點(diǎn)蛋白表達(dá)均明顯減少(P＜0.05）。24h時(shí)間點(diǎn)SP組蛋白水平顯著高于N組和其他治療組(P＜0.0

10、5)，8hSP組和SA組高于N組及SN組(P＜0.05)，但SP組和SA組無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。SN組顯著優(yōu)于N組。(2)觀察免疫熒光結(jié)果基本與免疫印跡結(jié)果一致，相比N組，假燙對(duì)照組ZO-1呈陽性顯示，熒光信號(hào)強(qiáng)，呈現(xiàn)出連續(xù)的狀態(tài);SP組和SA組蛋白表達(dá)低于SC組，但較N組和SN組熒光信號(hào)增強(qiáng)。
　　6、小腸組織含水率:燙傷各組較SC組兩時(shí)間點(diǎn)小腸組織含水率明顯增高(P＜0.05)，傷后8h，SP組及SA組較SN組及N組腸組織含水率有所降

11、低(P＜0.05)，SP組降低較SA組明顯(P＜0.05），SN組優(yōu)于N組。24h三治療組無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，N組全部死亡。
　　結(jié)論:
　　1、NaPyr-HES可以增加腸黏膜血流量，減輕燒傷引起的腸道微血管滲漏和組織水腫，對(duì)腸道有保護(hù)作用;
　　2、NaPyr-HES的作用明顯優(yōu)于NaCl-HES，并在一定程度上優(yōu)于NaAce-HES:
　　3、NaPyr-HES對(duì)腸道微血管內(nèi)皮屏障及腸上皮屏障的保護(hù)作用可能與其能