Rg1延緩D-gal POF小鼠模型生殖系統(tǒng)病理?yè)p害、改善生殖功能及其機(jī)制的研究.pdf

1、目的：
　　人參皂苷Rg1(Ginsenoside Rg1)是從中藥人參中提取出來(lái)的單體成分，具有抗衰老、抗氧化、抗纖維化的功能，并具有類雌激素樣活性。與現(xiàn)在常用治療卵巢早衰（premature ovarian failure POF）的方法激素補(bǔ)充治療(menopausal hormone therapy MHT)比較副作用較小,并可能改善 POF的生殖功能。本研究采用致衰劑 D-半乳糖（D-galactose D-gal）建立

2、POF小鼠模型，在建模過(guò)程中，當(dāng)動(dòng)情周期紊亂時(shí)加用Rg1進(jìn)行治療，觀察其治療效果，希望為恢復(fù)卵巢功能尋找一種新的治療方法并探討其作用機(jī)制。
　　方法：
　　1、建立POF小鼠模型：選取具有正常動(dòng)情周期C57小鼠，分為四組，每組10只，四組分別是：正常對(duì)照組、低劑量組（D-gal100mg/kg/d）、中劑量組（D-gal200mg/kg/d）、高劑量組（D-gal300mg/kg/d）。處理過(guò)程中觀察動(dòng)情周期；眼眶取血測(cè)血清

3、卵泡刺激素（follicle-stimulating hormone FSH），雌二醇（Estradiol2 E2）、抗苗勒管激素（Anti-Mullerian hormone AMH）；稱取小鼠體重，卵巢和子宮的重量，計(jì)算子宮卵巢的重量系數(shù)，HE染色計(jì)數(shù)各級(jí)卵泡數(shù)和黃體數(shù)，篩選出最佳建模劑量。
　　2、Rg1對(duì)生殖系統(tǒng)的作用：選取有正常動(dòng)情周期的C57小鼠100只，分為四組，每組25只，四組分別是：生理鹽水組，Rg1+D-gal

4、組/延緩衰老組，Rg1組，D-gal組/衰老組。觀察動(dòng)情周期變化；眼眶取血測(cè)血清性激素；稱取小鼠重量，子宮卵巢重量，計(jì)算子宮卵巢重量系數(shù)；子宮卵巢HE染色，計(jì)數(shù)各級(jí)卵泡和黃體數(shù)，觀察子宮內(nèi)膜厚度；子宮卵巢透射電鏡觀察超微結(jié)構(gòu)變化；檢測(cè)子宮和卵巢抗氧化指標(biāo)總超氧化物歧化酶（superoxide dismutase T-SOD）、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（glutathione peroxidase GSH-Px），氧化指標(biāo)丙二醛（malondi

5、aldehyde MDA）和炎性指標(biāo)白介素-1β（Interleukin-1βIL-1β）、白介素-6（interleukin-6 IL-6）、腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-αTNF-α）；免疫組化檢測(cè)卵巢顆粒細(xì)胞上卵泡刺激素受體（follicle-stimulating hormone receptor FSHr）的表達(dá)，并進(jìn)行定量分析；WB檢測(cè)卵巢FSHr、P53、P21、P19、P16蛋白的表達(dá)量；

6、RT-PCR檢測(cè)卵巢衰老因子P53、P21、stk，子宮衰老因子Bax、bcl-2 mRNA的表達(dá)；合籠實(shí)驗(yàn)，每組選取10只小鼠與雄鼠合籠，計(jì)數(shù)3個(gè)分娩周期幼鼠的數(shù)量；合籠實(shí)驗(yàn)前后D-gal組小鼠肺、肝臟、脾、腎臟HE染色檢查，比較其形態(tài)學(xué)變化。
　　結(jié)果：
　　1、復(fù)制POF小鼠模型D-gal劑量的篩選實(shí)驗(yàn)中，中劑量和高劑量組FSH明顯升高，E2、AMH明顯降低，卵泡數(shù)和黃體數(shù)都明顯減少，均達(dá)到了POF的標(biāo)準(zhǔn)，故本實(shí)驗(yàn)后續(xù)

7、研究采用中劑量組。
　　2、Rg1對(duì)生殖系統(tǒng)的作用研究結(jié)果：從注射D-gal的第三周開(kāi)始衰老組動(dòng)情周期紊亂，延緩衰老組在整個(gè)處理過(guò)程中動(dòng)情周期無(wú)明顯變化；衰老組卵巢、子宮的重量系數(shù)低于延緩衰老組，延緩衰老組與Rg1和生理鹽水組無(wú)明顯差異；卵巢HE染色，衰老組各級(jí)卵泡數(shù)和黃體數(shù)明顯減少，延緩衰老組卵泡和黃體數(shù)恢復(fù)正常，透射電鏡衰老組卵泡顆粒細(xì)胞中見(jiàn)大量凋亡小體，間質(zhì)中見(jiàn)壞死組織，延緩衰老組卵泡顆粒細(xì)胞未見(jiàn)明顯凋亡小體，間質(zhì)中未見(jiàn)壞死

8、組織；子宮透射電鏡，衰老組子宮肌層見(jiàn)大量纖維化，子宮內(nèi)膜變薄，延緩衰老組子宮的纖維化程度減輕，內(nèi)膜見(jiàn)腺體結(jié)構(gòu)；衰老組子宮和卵巢上抗氧化指標(biāo)T-SOD、GSH-Px明顯降低，氧化指標(biāo)MDA明顯升高；炎性指標(biāo)IL-1β、IL-6、TNF-α升高；顆粒細(xì)胞上FSHr蛋白的表達(dá)量降低；卵巢上P53、P21、P19、P16蛋白表達(dá)量明顯升高；卵巢上衰老基因P53、P21、stk，子宮上衰老因子Bax、bcl-2 mRNA的表達(dá)量明顯升高。然而，與

9、衰老組相比較，延緩衰老組抗氧化指標(biāo)明顯升高，氧化指標(biāo)，炎性指標(biāo)明顯降低，顆粒細(xì)胞上FSHr蛋白的表達(dá)量增高，子宮和卵巢上衰老因子蛋白和mRNA的表達(dá)明顯降低。延緩衰老組與生理鹽水組，Rg1組在上述指標(biāo)比較無(wú)明顯差異。合籠實(shí)驗(yàn)前，衰老組肺、肝臟、腎臟、脾HE染色都有明顯的炎性改變，經(jīng)合籠試驗(yàn)這段時(shí)間的修復(fù)，衰老組肺、肝臟、腎臟、脾的炎性改變已經(jīng)明顯恢復(fù)，但是檢測(cè)三周期分娩幼鼠的數(shù)量，衰老組分娩幼鼠的數(shù)量隨分娩次數(shù)增多而逐漸減少，D-gal