內(nèi)蒙古MDR-TB兩種實(shí)驗(yàn)室診斷方法的評(píng)估和VNTR基因分型的研究.pdf

1、目的：應(yīng)用GenoType MTBDRplus方法和熒光PCR熔解曲線法兩種分子學(xué)診斷方法，檢測(cè)內(nèi)蒙古地區(qū)耐多藥結(jié)核菌基因突變情況，評(píng)價(jià)其對(duì)耐多藥結(jié)核菌的臨床應(yīng)用價(jià)值；探討最優(yōu)VNTR位點(diǎn)組合，為內(nèi)蒙古地區(qū)結(jié)核分枝桿菌基因分型和分子流行病學(xué)研究提供借鑒。
　　方法：菌株來源于2001年WHO/IUATLD全球抗結(jié)核藥物耐藥監(jiān)測(cè)之內(nèi)蒙古耐藥結(jié)核病監(jiān)測(cè)菌株1114株，其中比例法藥敏結(jié)果得到耐多藥結(jié)核菌188株，將其作為本實(shí)驗(yàn)的研究對(duì)象

2、，利用GenoType MTBDRplus方法和熒光PCR熔解曲線法分別檢測(cè)這188株耐多藥結(jié)核菌菌株對(duì)利福平和異煙肼的耐藥情況。采用VNTR基因分型方法對(duì)選取的21個(gè)VNTR位點(diǎn)進(jìn)行單位點(diǎn)和不同位點(diǎn)組合的分辨力（Hunter—Gaston指數(shù)，HGI）分析，探討適合內(nèi)蒙古地區(qū)的最優(yōu)VNTR位點(diǎn)組合。
　　結(jié)果：耐多藥檢出率：GenoType MTBDRplus方法為56.38％（106/188），熒光PCR熔解曲線法為68.62

3、%（129/188）；利福平耐藥檢出率：GenoType MTBDRplus方法為84.04%（158/188），熒光PCR熔解曲線法為82.98%（156/188）；異煙肼耐藥檢出率：GenoType MTBDRplus方法為61.70%（116/188），熒光PCR熔解曲線法為75.53%（142/188）。采用SPSS13.0軟件分別對(duì)利福平、異煙肼耐藥和耐多藥菌株做配對(duì)設(shè)計(jì)四格表的X2檢驗(yàn)，取檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。比較兩種實(shí)驗(yàn)室

4、診斷方法對(duì)利福平耐藥的檢測(cè)效果：X2=0.0625，P=0.804>0.05，兩種方法檢測(cè)效果差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；兩種實(shí)驗(yàn)室診斷方法對(duì)異煙肼耐藥的檢測(cè)效果：X2=18.38，P=0.0001<0.05，兩種方法檢測(cè)效果差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；兩種實(shí)驗(yàn)室診斷方法對(duì)耐多藥菌株的檢測(cè)效果：X2=12.90，P=0.0001<0.05，兩種方法檢測(cè)效果差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。選取的22個(gè)MIRU-VNTR位點(diǎn)除VNTR3336無法獲得單一條帶被剔除外，其余2

5、1個(gè)位點(diǎn)經(jīng)優(yōu)化組合后共分為包括國際通用標(biāo)準(zhǔn)15位點(diǎn)在內(nèi)的8組，其HGI都在0.999以上，其中位點(diǎn)數(shù)目最少的VNTR組合為5位點(diǎn)，標(biāo)準(zhǔn)15位點(diǎn)VNTR分型方案HGI為0.99977。
　　結(jié)論：GenoType MTBDRplus方法和熒光PCR熔解曲線法都可適用于對(duì)內(nèi)蒙古地區(qū)結(jié)核菌的耐藥檢測(cè)，兩種實(shí)驗(yàn)室診斷方法對(duì)利福平耐藥的檢測(cè)效果優(yōu)于異煙肼耐藥檢測(cè)效果。兩種實(shí)驗(yàn)室診斷方法對(duì)利福平耐藥的檢測(cè)效果相同，而對(duì)異煙肼耐藥和耐多藥菌株的