2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、背景:氧化應激是加重腦缺血再灌注損傷的主要因素之一。近年來發(fā)現(xiàn),內源性抗氧化系統(tǒng)的上調對缺血再灌注損傷后神經(jīng)細胞的存活有著至關重要的作用。Thioredoxin-1(Trx1)作為一種內源性的小分子抗氧化蛋白,在神經(jīng)系統(tǒng)中能夠抵御氧化應激損傷。然而,其保護作用及其發(fā)揮作用的機制尚不清楚。
  目的:探討Trx1對OGD/R誘導的星形膠質細胞氧化應激損傷的抗氧化保護作用及潛在機制。
  方法:(1)構建四條Trx1 RNAi慢

2、病毒載體(LV3-54, LV3-135, LV3-222, LV3-288)及一條陰性載體LV3-NC,感染傳代培養(yǎng)的星形膠質細胞,在倒置熒光顯微鏡下觀察細胞形態(tài)和轉染效率,用 RT-PCR和Western blot檢測干擾效率,篩選出干擾效果最為顯著的病毒片段。
  (2) Trx1基因干擾后,建立星形膠質細胞的氧糖剝奪/復氧( Oxygen-glucose deprivation/reoxygenation, OGD)模型,

3、采用MTS/LDH方法檢測細胞活性及細胞損傷程度。RT-PCR和Western blot進一步測定Trx1以及2-Cys Peroxiredoxin(Prdxs)的基因和蛋白表達。
 ?。?)體外構建 TRE序列突變型熒光素酶報告基因( Trx1(MtTRE)-Luc)和AP-1質粒,選擇HEK293細胞進行共轉染,利用雙熒光素酶報告基因檢測試劑盒檢測TRE序列突變對于Trx1基因調控水平變化的影響。
  結果:(1)慢病毒

4、感染星形膠質細胞后,PT-PCR的結果顯示,與對照組相比,LV3-288的干擾效率最為顯著(p<0.01)。
  (2)MTS和LDH的結果顯示,干擾Trx1可以導致OGD/R后星形膠質細胞存活率的降低及細胞損傷程度的增加。RT-PCR和Western blot分析顯示,干擾Trx1可以降低2-Cys Prdxs的蛋白表達,而升高Prdx-SO3的表達。
  (3)雙熒光素酶報告基因的結果顯示,和AP-1結合的序列TRE元件

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