Hemin誘導(dǎo)的HO-1對離體星形膠質(zhì)細(xì)胞的損傷及相關(guān)機(jī)制研究.pdf

1、目的：1、觀察氯化高鐵血紅素(Hemin)誘導(dǎo)的血紅素氧合酶-1(Heme oxygenase-1， HO-1)對離體星形膠質(zhì)細(xì)胞(Astrocytes, AC)的損傷情況及各組AC中JNK、p38、ERK1/2、Bcl-2、Bax等蛋白表達(dá)變化規(guī)律。2、進(jìn)一步探討HO-1對離體星形膠質(zhì)細(xì)胞AC損傷的相關(guān)機(jī)制。
　　 方法：選取新生24h內(nèi)的SD大鼠大腦皮層新鮮腦組織，參照McCarthy等方法加以改進(jìn)，體外培養(yǎng)及純化培養(yǎng)獲得A

2、C，采用神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白(glia fibrillary acid protein, GFAP)免疫熒光鑒定AC，將AC分為正常對照組（C組）、誘導(dǎo)劑Hemin組(H組)及Hemin+鋅原卟啉(Zinc protoporphyrin， Zn-PPIX)組(HZ組)。倒置顯微鏡及Hoechst33342觀察細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化；Cell Counting Kit-8(CCK-8)及流式細(xì)胞儀(flow cytometry, FCM)檢測細(xì)

3、胞的活力變化及細(xì)胞凋亡情況：逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測HO-1的mRNA含量：免疫印跡法(Western blot)檢測HO-1、Bcl-2、Bax、p-p38、p38、p-JNK、JNK、p-ERK1/2、ERK1/2等蛋白的表達(dá)變化。
　　 結(jié)果：1、GFAP免疫熒光染色鑒定顯示純化的細(xì)胞97％以上為AC。2、H組及HZ組在倒置顯微鏡下部可見星形膠質(zhì)細(xì)胞胞體皺縮、變圓、突起細(xì)短、折光率明顯增強(qiáng)及部分細(xì)胞脫壁，但

4、HZ組形態(tài)學(xué)變化相對較輕。進(jìn)一步通過Hoechst33342染色可見這兩組細(xì)胞胞核呈致密濃染或碎塊狀致密濃染，HZ組細(xì)胞較H組相比致密濃染或碎塊狀致密濃染的胞核數(shù)目明顯減少。3、CCK-8法及流失細(xì)胞儀檢測顯示H組及HZ組細(xì)胞存活率較C組顯著下降，凋亡率明顯上升(P＜0.001):而HZ組與H組相比，存活率上升，凋亡率明顯下降，且都具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。4、Western blot及RT-PCR法檢測HO-1表達(dá)情況示：與對照

5、組相比，H組及HZ組HO-1的表達(dá)明顯增多，且具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.001)；而HZ組與H組比較，HO-1的表達(dá)下降，但P＞0.05，無統(tǒng)計學(xué)意義。進(jìn)一步結(jié)果顯示：Hemin可以明顯上調(diào)Bax、p38、p-JNK及p-ERK1/2等蛋白表達(dá)，下調(diào)Bcl-2等蛋白表達(dá)：而Zn-PPIX可減弱Hemin的上述作用。
　　 結(jié)論：1、Hemin誘導(dǎo)的HO-1對星形膠質(zhì)細(xì)胞具有損傷作用，可加速其凋亡過程，而Zn-PPIX可以部分逆轉(zhuǎn)上