蝦肝腸胞蟲的流行病學(xué)及其致對蝦生長緩慢機理的探索.pdf

1、近些年來，東南亞的養(yǎng)殖場對蝦生長緩慢的現(xiàn)象被越來越多的報道出來。在這些生長較為緩慢的對蝦肝胰腺中檢測到了蝦肝腸胞蟲(Enterocytozoon hepatopenaei,EHP)陽性。目前認為EHP是影響對蝦生長緩慢的最主要的病原，成為對蝦養(yǎng)殖的最大威脅之一，嚴重影響了對蝦養(yǎng)殖業(yè)的產(chǎn)量增長，造成了嚴重的經(jīng)濟損失。本研究通過流行病學(xué)調(diào)查，不同組織EHP載量與對蝦生長參數(shù)分析，血淋巴ATP含量測定、蛋白質(zhì)濃度測定，原位雜交等技術(shù)手段，旨在

2、了解EHP的流行情況及在對蝦體內(nèi)的分布情況，探索EHP導(dǎo)致凡納濱對蝦(Litopenaeus vannamei)生長停滯或緩慢的機制。
　　對來自河北黃驊(HH)、山東平度(PD)、江蘇吳江(WJ)和山東日照(RZ)的4個凡納濱對蝦群體進行了對蝦生長參數(shù)測量，用TaqMan qPCR檢測了各群體對蝦的肝胰腺組織中和RZ群體對蝦的多種組織中的EHP感染載量。結(jié)果表明，在主要生長相關(guān)參數(shù)上RZ群體最優(yōu)，該群體EHP量也最低。不同群體的

3、樣本數(shù)-EHP對數(shù)直方圖的模式存在差異，HH和PD群體的EHP對數(shù)呈雙峰分布，而WJ和RZ群體的EHP對數(shù)呈單峰分布，代表EHP在不同群體中可能存在不同的傳播模式。EHP對數(shù)呈單峰分布的群體或從多峰分布的群體中分離出的高EHP對數(shù)子群體的對蝦體長或體重與EHP對數(shù)呈顯著的負相關(guān)性。在群體水平上EHP顯著增加體重指數(shù)的變異系數(shù)。
　　為進一步了解凡納濱對蝦EHP陽性個體中，EHP的分布情況，對來自山東日照的一批凡納濱對蝦共48尾，解

4、剖對蝦后分別對肝胰腺、腸道、肌肉、血淋巴和鰓五種組織進行了EHP的Taqman實時熒光定量檢測，檢測結(jié)果顯示群體中各個體不同組織中EHP從高到低的順序依次是肝胰腺>中腸>血淋巴>鰓>肌肉。肝胰腺、中腸和鰓三個組織中EHP對數(shù)相互間的相關(guān)性呈99.9％的極顯著水平(P＜0.001)；除了中腸與血淋巴和肝胰腺與血淋巴以外，其余組織間EHP對數(shù)的相關(guān)性也達到極顯著(P＜0.01)或顯著(P＜0.05)水平。在腸道和鰓組織中EHP拷貝數(shù)對數(shù)與對

5、蝦體重指數(shù)(Ponderal index,Pi)有一定的負相關(guān)性，并且肌肉中EHP平均載量最低。
　　通過對血淋巴和肌肉組織進行蛋白質(zhì)含量、血淋巴ATP含量的測定，及與EHP載量和對蝦生長參數(shù)的相關(guān)性的分析，可見肌肉蛋白含量與血淋巴、肌肉EHP載量對數(shù)達到95%的負相關(guān)水平。血淋巴中的ATP濃度與血淋巴中和肝胰腺中的EHP載量均呈現(xiàn)出顯著的負相關(guān)性，與5種組織EHP載量之和對數(shù)達到99.5%的負相關(guān)性水平。經(jīng)過SigmaPlot1

6、2.0回歸分析，得到血淋巴ATP含量與所有組織中EHP載量之和對數(shù)的關(guān)系式為：ATP濃度=-(0.060±0.019)Log(EHP載量)+(2.326±0.238)。證明EHP的確通過截取宿主的ATP而影響對蝦的生長的機制，并從一定程度上影響了對蝦肌肉蛋白的積累。
　　為尋找EHP在對蝦體內(nèi)分布的直接證據(jù)，依據(jù)GenBank中公布的EHP SSU rDNA序列(KF362129)，設(shè)計了一對原位雜交探針的PCR擴增引物，用DIG

7、標記的EHP探針對肝胰腺、肌肉、鰓、腸道組織的原位雜交顯示，肝胰腺是主要的EHP感染組織，其他組織中雜交信號較弱，但各組織中有少數(shù)細胞的EHP感染。
　　本研究通過qPCR獲得了EHP在凡納濱對蝦不同群體和不同組織中感染量的準確數(shù)據(jù)，觀察到群體中不同個體的EHP感染發(fā)生在較接近的時間點時，其EHP載量與對蝦的生長參數(shù)呈顯著的負相關(guān)性，群體內(nèi)的EHP感染會顯著增加體重指數(shù)的變異系數(shù)；EHP能在多組織中檢出，肝胰腺和中腸中分布最多，原