延胡索及其偽品的鑒別研究.pdf

1、目的:
　　在中醫(yī)藥理論的指導(dǎo)下，綜合采用TLC、IR、HPLC、DNA barcoding等現(xiàn)代分析技術(shù)對(duì)延胡索及其偽品進(jìn)行研究，建立專屬性強(qiáng)、可適用于不同需求的延胡索真?zhèn)舞b別方法。
　　方法:
　　1.采用薄層色譜發(fā)對(duì)延胡索正品及偽品進(jìn)行鑒別研究，對(duì)《中國藥典》延胡索項(xiàng)下薄層色譜條件進(jìn)行優(yōu)化，增加特異性對(duì)照品，使方法更加適用于延胡索和偽品的鑒別。
　　2.采用紅外光譜法對(duì)延胡索進(jìn)行指紋圖譜研究，并對(duì)39批樣品

2、的紅外光譜進(jìn)行相似度分析，再結(jié)合聚類分析的方法，進(jìn)行真?zhèn)舞b別。
　　3.采用高效液相指紋圖譜法對(duì)延胡索及其偽品進(jìn)行研究，對(duì)39批樣品的高效液相色譜指紋圖譜相似度進(jìn)行比較，從而區(qū)分出正偽品。
　　4.采用DNA分子生物學(xué)方法，分析比較不同序列的鑒別效率，確定延胡索DNA條形碼。在分子研究的基礎(chǔ)上，分析并設(shè)計(jì)特征引物，并利用此引物應(yīng)用位點(diǎn)特異性PCR的方法，完成鑒別。
　　結(jié)果:
　　1.在《中國藥典》延胡索TLC鑒

3、別方法的基礎(chǔ)上，優(yōu)化了其薄層色譜鑒別方法，增加了四氫黃連堿和紫堇堿兩個(gè)特征的對(duì)照品，提高了色譜的專屬性。
　　2.采用粉末直接壓片，測(cè)定紅外光譜，以其中26批延胡索正品的紅外光譜圖建立了延胡索紅外光譜平均圖譜，通過對(duì)圖譜的整體特征的對(duì)比，正品紅外光譜與平均光譜的相似度大部分大于0.9，偽品的相似度則全部低于0.9。結(jié)合聚類分析的方法進(jìn)行分析，延胡索正品偽品的紅外光譜能夠被成功的區(qū)分。達(dá)到快速有效鑒別的目的。
　　3.建立了延

4、胡索HPLC指紋圖譜，以樣品中26批正品延胡索建立了HPLC指紋圖譜共有模式，確定了17個(gè)共有峰，指認(rèn)出3、7、8、9、12、13、14、15號(hào)峰分別為原阿片堿、鹽酸巴馬汀、鹽酸小檗堿、去氫紫堇堿、延胡索乙素、四氫小檗堿、紫堇堿、脫氫海罌粟堿。39批樣品圖譜相似度計(jì)算可得出，26批延胡索正品的相似度在0.90以上，13批偽品的相似度均在0.85以下。
　　4.確定了延胡索4個(gè)DNA片段的PCR條件，并通過遺傳距離檢驗(yàn)、barcod

5、ing gap檢驗(yàn)、建樹法等方法分析評(píng)價(jià)各片段的鑒定效率，確定ITS2序列能夠成功區(qū)分延胡索及各種偽品，可作為延胡索的DNA條形碼。
　　5.對(duì)比正偽品的ITS2序列，尋找出差異位點(diǎn)，設(shè)計(jì)了一對(duì)特異引物，建立了延胡索位點(diǎn)特異性PCR方法。通過利用特異引物進(jìn)行PCR檢測(cè)，可成功對(duì)延胡索的正偽品進(jìn)行區(qū)分，可達(dá)到快速、專屬鑒別延胡索的目的。
　　結(jié)論:
　　本研究通過對(duì)延胡索及其偽品的薄層色譜、紅外光譜、高效液相色譜指紋圖譜