當(dāng)歸及其混偽品的分子鑒定研究.pdf

1、目的:用DNA條形碼trnL-F以及ropC1序列對(duì)當(dāng)歸及其混偽品進(jìn)行鑒別，尋找出適合當(dāng)歸鑒別的DNA條形碼，建立其分子鑒定方法;構(gòu)建當(dāng)歸的簡(jiǎn)單重復(fù)序列(inter-simple sequence repeat，ISSR)的多態(tài)性指紋圖譜，并建立序列特異性擴(kuò)增區(qū)(sequence characterizedamplified region，SCAR)標(biāo)記技術(shù)，為當(dāng)歸的快速分子鑒定提供支持;并初步探究當(dāng)歸中成藥中SCAR標(biāo)記的適用性;

2、r>　　方法:對(duì)25份當(dāng)歸及其混偽品材料的trnL-F以及ropC1序列進(jìn)行擴(kuò)增、測(cè)序。對(duì)序列進(jìn)行比對(duì)、分析，計(jì)算材料間的遺傳距離并構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù);通過(guò)篩選ISSR引物，找到特異性的當(dāng)歸條帶，對(duì)其測(cè)序并設(shè)計(jì)引物得到SCAR標(biāo)記;通過(guò)四種不同的DNA提取方法:CTAB法、SDS法、磁珠法及改良CTAB法對(duì)當(dāng)歸中成藥中的總DNA進(jìn)行提取，并用trnL-F以及SCAR標(biāo)記對(duì)其中當(dāng)歸進(jìn)行驗(yàn)證;
　　結(jié)果:trnL-F以及ropC1序列對(duì)當(dāng)

3、歸及其混偽品均可成功擴(kuò)增并測(cè)序，trnL-F序列能鑒別當(dāng)歸及其混偽品，數(shù)據(jù)顯示當(dāng)歸及其混偽品材料具有顯著堿基差別，在當(dāng)歸的鑒定方面具有重要的意義，而ropC1序列無(wú)法找出當(dāng)歸及其混偽品間的差異位點(diǎn)，對(duì)當(dāng)歸鑒別意義較弱;14條ISSR引物中，共擴(kuò)增出135條條帶，多態(tài)性比例高達(dá)90.37％，其中有4條為當(dāng)歸的特異性條帶;根據(jù)ISSR引物設(shè)計(jì)的SCAR標(biāo)記對(duì)6種正品當(dāng)歸為陽(yáng)性結(jié)果，對(duì)其余近緣種屬則為陰性結(jié)果;四種方法提取DNA電泳及微量紫外

4、分光光度計(jì)均未顯示有結(jié)果，但對(duì)其trnL-F及SCAR標(biāo)記進(jìn)行擴(kuò)增后，改良CTAB法出現(xiàn)了明顯的條帶，其余方法未見(jiàn)有擴(kuò)增條帶;
　　結(jié)論:ropC1序列對(duì)當(dāng)歸及其混偽品間的鑒別作用不佳，而trnL-F序列能成功鑒定當(dāng)歸及其混偽品，可作為當(dāng)歸及混偽品的分子鑒定方法;開(kāi)發(fā)的SCAR標(biāo)記可以成功的對(duì)當(dāng)歸及其混偽品進(jìn)行鑒別，對(duì)當(dāng)歸的鑒別具有重要意義;改良CTAB法為中成藥DNA提取提供了新方法，解決了中成藥無(wú)法進(jìn)行分子鑒定的瓶頸，并在SC