2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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1、目的:觀(guān)察茶堿對(duì)過(guò)氧化氫暴露下C2C12小鼠成肌細(xì)胞(C2C12細(xì)胞)炎癥的抑制作用。
  方法:⑴觀(guān)察不同濃度過(guò)氧化氫(H202)和茶堿對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響:以C2C12細(xì)胞為研究對(duì)象,細(xì)胞分化成熟后使用終濃度分別為0.1mmol/L、0.2mmol/L、0.3mmol/L、0.4mmol/L、0.6mmol/L和0.8mmol/L的H202,和終濃度分別為1mol/L、0.1mol/L、0.01 mol/L、0.001 mol/L

2、和0.0001 mol/L的茶堿干預(yù)細(xì)胞24h,進(jìn)一步采用四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)法確定對(duì)C2C12細(xì)胞的合適藥物濃度。⑵觀(guān)察茶堿是否能下調(diào)過(guò)氧化氫暴露下C2C12細(xì)胞內(nèi)核因子-κB(NF-κB)的表達(dá)和炎癥介質(zhì)釋放:將分化好的細(xì)胞分為空白對(duì)照組、過(guò)氧化氫組(過(guò)氧化氫干預(yù)細(xì)胞24小時(shí))、茶堿組(茶堿干預(yù)細(xì)胞24小時(shí))、過(guò)氧化氫+茶堿組(過(guò)氧化氫和茶堿共同干預(yù)細(xì)胞24小時(shí))、吡咯烷二硫氨基甲酸(PDTC)+過(guò)氧化氫組。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)

3、(ELISA)檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清白細(xì)胞介素-8(IL-8)和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)的含量,實(shí)時(shí)熒光定量聚酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)NF-κB mRNA相對(duì)表達(dá)量的情況,蛋白印跡實(shí)驗(yàn)(Western blot)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)NF-κB蛋白的表達(dá)情況,凝膠遷移實(shí)驗(yàn)(EMSA)檢測(cè)細(xì)胞核內(nèi)NF-κB活性。數(shù)據(jù)采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
  結(jié)果:①選擇濃度為0.4%的過(guò)氧化氫和0.001 mol/L的茶堿對(duì)C2

4、C12細(xì)胞生長(zhǎng)無(wú)明顯影響。②茶堿對(duì)炎癥因子(IL-8、TNF-α)的影響:過(guò)氧化氫組細(xì)胞上清液炎癥因子(IL-8、TNF-α)含量明顯高于空白對(duì)照組及茶堿組(P<0.05),茶堿+過(guò)氧化氫組IL-8、TNF-α較過(guò)氧化氫組減少(P<0.05);PDTC+過(guò)氧化氫組炎癥因子(IL-8、TNF-α)明顯低于過(guò)氧化氫組(P<0.05)。③茶堿對(duì)NF-κB的mRNA相對(duì)表達(dá)量的影響:過(guò)氧化氫組NF-κB的mRNA相對(duì)表達(dá)量明顯高于空白對(duì)照組及茶

5、堿組(P<0.05),茶堿+過(guò)氧化氫組NF-κB的mRNA相對(duì)表達(dá)量較過(guò)氧化氫組減少(P<0.05);PDTC+過(guò)氧化氫組NF-κB的mRNA相對(duì)表達(dá)量明顯低于過(guò)氧化氫組(P<0.05)。④茶堿對(duì)NF-κB蛋白表達(dá)量的影響:過(guò)氧化氫組NF-κB蛋白表達(dá)量明顯高于空白對(duì)照組及茶堿組(P<0.05),茶堿+過(guò)氧化氫組NF-κB蛋白表達(dá)量較過(guò)氧化氫組減少(P<0.05);PDTC+過(guò)氧化氫組NF-κB蛋白表達(dá)量明顯低于過(guò)氧化氫組(P<0.05

6、)。⑤茶堿對(duì)NF-κB細(xì)胞核內(nèi)活性的影響:過(guò)氧化氫組NF-κB細(xì)胞核內(nèi)活性明顯高于空白對(duì)照組及茶堿組(P<0.05),茶堿+過(guò)氧化氫組NF-κB細(xì)胞核內(nèi)活性較過(guò)氧化氫組減少(P<0.05),較PDTC+過(guò)氧化氫組升高(P<0.05);PDTC+過(guò)氧化氫組NF-κB細(xì)胞核內(nèi)活性明顯低于過(guò)氧化氫組(P<0.05)。
  結(jié)論:茶堿可以下調(diào)過(guò)氧化氫暴露下C2C12小鼠成肌細(xì)胞內(nèi)NF-κB的活性,減少I(mǎi)L-8和TNF-α的釋放,抑制骨骼肌

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