誘導(dǎo)子對顛茄毛狀根生長及托品烷類生物堿代謝機理初步研究.pdf

1、顛茄(Atropa belladonna L.)是茄科顛茄屬多年生的草本植物。全草可入藥，是民間傳統(tǒng)的藥用植物。但是藥用植物的藥用成分含量低一直是困擾人們的一大難題，而添加誘導(dǎo)子是目前提高有效成分常用且有效的方法。目前對顛茄的研究主要集中在代謝途徑中關(guān)鍵酶基因的研究，而通過添加誘導(dǎo)子來提高次生代謝產(chǎn)物合成與積累的研究較少。本文以顛茄毛狀根為材料，通過添加四種不同濃度的誘導(dǎo)子，測定毛狀根的生物量與托品烷類生物堿的含量，篩選出最適誘導(dǎo)子及濃

2、度。再用四種誘導(dǎo)子處理顛茄毛狀根，研究不同誘導(dǎo)子對顛茄毛狀根生長過程中生理指標(biāo)、NO及H2O2含量、托品烷類生物堿代謝途徑中關(guān)鍵酶基因的表達(dá)量的影響，以期從這三個方面初步探究誘導(dǎo)子對毛狀根生長及托品烷類生物堿積累的機理。主要研究結(jié)果如下：
　　1.研究顛茄毛狀根的生長曲線結(jié)果表明：在0-3d生長緩慢，屬于生長延伸期。3-21d，毛狀根的生長快速，處于快速生長期。21-27d毛狀根的增長緩慢，屬于生長的穩(wěn)定期。在27d以后毛狀根的鮮

3、質(zhì)量與干質(zhì)都量出現(xiàn)下降的趨勢，且托品烷類生物堿的含量也減少。6-12d內(nèi)托品烷類生物堿的含量迅速增長。但在12-21d，托品烷類生物堿的含量處于穩(wěn)定階段。
　　2.研究四種誘導(dǎo)子茉莉酸甲酯（MJ）、硝酸銀（AgNO3）、水楊酸（SA）、酵母提取物（YE）對顛茄毛狀根生長及托品烷類生物堿的影響發(fā)現(xiàn)：MJ抑制了毛狀根的生長及托品烷類生物堿的含量，而AgNO3雖然抑制了顛茄毛狀根的生長，但卻顯著地提高了托品烷類生物堿的含量，托品烷類生物

4、堿的產(chǎn)量在100μmol·L-1最大。SA較小程度的抑制了毛狀根的生長，提高了東莨菪堿的含量。YE隨試驗濃度的升高，對毛狀根的生長及次生代謝產(chǎn)物的積累的促進作用也增強。說明誘導(dǎo)子對顛茄毛狀根的生長及托品烷類生物堿的積累具有選擇性，AgNO3是提高毛狀根中托品烷類生物堿含量的最佳誘導(dǎo)子，而YE對顛茄毛狀根生長及托品烷類生物堿的產(chǎn)量提高均有效果。
　　3.研究誘導(dǎo)子對顛茄毛狀根生長過程中部分生理指標(biāo)的影響發(fā)現(xiàn)：誘導(dǎo)子的添加導(dǎo)致了丙二醛

5、（MDA）含量的升高，其中SA對MDA含量的影響最大；其次，各處理組均可以顯著性地提高毛狀根中脯氨酸（Pro）的含量，其中YE處理最為明顯，達(dá)到8.16μg·g-1FM，是對照組的3.92倍；同時，各誘導(dǎo)子處理組與對照組相比，顛茄毛狀根中可溶性糖與可溶性蛋白的含量均有顯著性地提高，其中AgNO3與SA對可溶性糖含量的影響較為明顯，分別是對照的1.58、1.60倍。而YE卻對可溶性蛋白含量的提高最為明顯，達(dá)到了10.53mg·g-1FM，

6、較對照增加了22.31％。
　　4.誘導(dǎo)子的添加使處理組與對照組相比顯著性地提高了NO的含量，其中。MJ對NO含量影響最為明顯，達(dá)到了51.76μmol·L-1·g FM，是對照的1.61倍，且與SA、YE處理出現(xiàn)顯著性差異；其次，四種誘導(dǎo)子處理也刺激了H2O2迸發(fā)，除YE處理與對照沒有顯著性差異外，其余三種處理均顯著性提高可H2O2的含量，分別比對照提高了28.25%（MJ）、72.45%（AgNO3）、17.84%（SA），而

7、YE處理僅僅比對照提高了4.79%。
　　5.誘導(dǎo)子對顛茄毛狀根代謝途徑中關(guān)鍵酶基因表達(dá)的影響：首先，除MJ處理對pmt基因的表達(dá)沒有顯著性差異外，其他三種誘導(dǎo)子均能顯著性地刺激pmt基因的表達(dá)，YE刺激pmt基因表達(dá)的效果最為明顯，達(dá)到對照的242.22%；其次。MJ處理同樣也沒有刺激trI基因的表達(dá)，反而抑制了該基因的表達(dá)，但不存在顯著性。而其他三組誘導(dǎo)子卻顯著性地提高trI基因的表達(dá)；最后，與對照相比，四種誘導(dǎo)子均提高了h6