白臀葉猴屬(Pygathrix)走私樣本的鑒定.pdf

1、本研究的實驗材料是被中國海關(guān)查獲由越南走私入境，不知道確切來源地的28個白臀葉猴屬（Pygathrix）干制樣本。研究目的是為了確定該樣本的來源地、種類和樣本的性別，從而調(diào)查出野生動物非法貿(mào)易地。研究采用PCR 方法擴增樣本線粒體控制區(qū)高變區(qū)Ⅰ基因，利用測定序列與白臀葉猴的國外數(shù)據(jù)庫進行比對鑒定樣本來源地和種類。對測定序列進行分析，用MEGA4.0軟件，以白頭葉猴為外群構(gòu)建系統(tǒng)樹。通過性別鑒定的SRY和AMEL 特異引物進行PCR 擴增

2、，鑒定個體的性別。同時利用微衛(wèi)星標(biāo)記的分析方法，對28個白臀葉猴樣本進行親緣關(guān)系的鑒定。 結(jié)果顯示，白臀葉猴線粒體控制區(qū)的高變區(qū)Ⅰ序列均長401bp。在全部401個線粒體控制區(qū)位點中，其中有40個簡約信息位點，和5個單態(tài)位點。共有374個不變位點，49個可變位點。平均堿基對存在4個A-G轉(zhuǎn)換，6個T-C轉(zhuǎn)換，顛換較少，表現(xiàn)出轉(zhuǎn)換偏倚，沒有缺失和插入。通過與國外數(shù)據(jù)庫比對（Roos，靈長類基因數(shù)據(jù)庫），確定這28個樣本均為黑腿白臀

3、葉猴（Pygathrix nigripes）。20個走私樣本都來自于越南慶和?。↘hanh Hoa）；3個走私樣本來自越南平福?。˙inh Phuoc）和柬埔寨的蒙多基里?。∕ondulkiri）；18 號來自越南多樂省（Dak Lak）和林同?。↙amDong）；還有4個樣本的確切來源地不清楚。性別鑒定結(jié)果表明，28個樣本中，有17個雌性個體，11個雄性個體。其中來自于越南慶和省的20個樣本中有12個雌性個體，7個雄性個體；來自于越南

4、平福省和柬埔寨的蒙多基里省的3個樣本中有1個雌性個體，2個雄性個體；來自越南多樂省和林同省的18 號樣為雄性；不知道確切來源地的4個樣本全為雌性。利用8 對白臀葉猴的微衛(wèi)星引物，我們進行親緣關(guān)系分析，發(fā)現(xiàn)來自慶和省的20個樣本可能存在幾個群，而來自平福省的樣本很可能都是來自于同一個群。這說明來自慶和省的那些個體中有被偷獵者整群獵殺的，而來自其他地點的個體是被隨機獵殺的。 本研究利用測定樣本線粒體序列的分子生物學(xué)方法，成功鑒定了走

5、私樣本屬于黑腿白臀葉猴。從而為海關(guān)鑒定走私白臀葉猴樣本提供了一種靈敏而可靠的方法。 樣本來源地的確定，也為黑腿白臀葉猴的保護提供有力的支持。從越南地圖可以看出慶和省臨中國南海，水上交通發(fā)達(dá)；而平福省臨近柬埔寨，是進出柬埔寨的陸地交通要道之一。這些有利地形為不法分子的走私活動提供了便利。確定走私白臀葉猴樣本的來源地，為進一步調(diào)查出野生動物非法貿(mào)易地，準(zhǔn)確打擊瀕危野生動物的走私活動，提供了可靠的依據(jù)。這對于白臀葉猴種群的國際保護很有