先天性巨結(jié)腸差異lncRNA-mRNA共表達(dá)譜芯片初步篩查研究.pdf

1、目的：通過(guò)芯片篩查出先天性巨結(jié)腸病變段腸管與正常段腸管中差異lncRNA-mRNA共表達(dá)譜，并對(duì)其進(jìn)行功能分析，探索 lncRNA在 HD中的作用及其作用機(jī)制，為HD早期診斷、早期治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：收集2013年10月到2015年9月期間在遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院小兒普胸泌外科確診為先天性巨結(jié)腸并進(jìn)行手術(shù)治療的17例患兒標(biāo)本（病變段及正常段腸管）；選取其中5例患者的標(biāo)本（共10段腸管）進(jìn)行人類(lèi)lncRNA-mRNA共表達(dá)譜芯

2、片篩查，同時(shí)采用Agilent GeneSpring軟件對(duì)差異表達(dá)的lncRNA、mRNA進(jìn)行篩選。對(duì)篩查出差異表達(dá)明顯的lncRNA進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qRT-PCR）驗(yàn)證；采用生物信息學(xué)的方法分析lncRNA、mRNA在先天性巨結(jié)腸的作用。
　　結(jié)果：芯片結(jié)果顯示在先天性巨結(jié)腸病變段腸管中有353個(gè)表達(dá)明顯上調(diào)的lncRNA，有474個(gè)明顯下調(diào)的lncRNA（選擇標(biāo)準(zhǔn)為差異倍數(shù)>2，P<0.05）。mRNA的表達(dá)中有865

3、個(gè)明顯上調(diào)，461個(gè)明顯下調(diào)（選擇標(biāo)準(zhǔn)為差異倍數(shù)>2，P<0.05）。對(duì)其中6個(gè)顯著差異表達(dá)的lncRNA(TCONS_00029197、ENST00000438136.1?ENST00000445908.1、ENST00000455286.1、ENST00000579378.1和TCONS_00028253)進(jìn)行 qRT-PCR驗(yàn)證?其中 TCONS_00029197、 ENST00000445908.1、ENST0000045528

4、6.1在先天性巨結(jié)腸中表達(dá)顯著上調(diào)，而 ENST00000579378.1表達(dá)顯著下調(diào)，P<0.05，與芯片結(jié)果相符。ENST00000438136.1雖然在先天性巨結(jié)腸中存在表達(dá)上調(diào)，但其差異表達(dá)不顯著，P>0.05，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。其中TCONS_00028253由于引物經(jīng)多次設(shè)計(jì)未成功，未進(jìn)行差異表達(dá)分析。生物信息學(xué)分析結(jié)果顯示差異基因與細(xì)胞遷移、定植、軸突生長(zhǎng)、細(xì)胞-基底粘附、酶活性等功能相關(guān)。
　　結(jié)論：先天性巨結(jié)腸患兒病