CRLF2基因改變?cè)趦和毙訠淋巴細(xì)胞白血病中的特征及其對(duì)預(yù)后的影響.pdf

1、目的：近幾年來(lái)隨著基因?qū)W及染色體檢查的快速發(fā)展，發(fā)現(xiàn)兒童淋巴細(xì)胞白血病患者染色體數(shù)目異常比率很高，包括超二倍體、亞二倍體以及易位，包括現(xiàn)在已經(jīng)作為診斷預(yù)判的指標(biāo)t(12;21)(ETV6/RUNX1),t(9;22)(BCR/ABL1)，t(1;19)(TCF/PBX1)以及MLL重排。說(shuō)明分子標(biāo)志物在兒童白血病診斷及預(yù)后判斷中起著重要的作用。目前仍有很多染色體或基因異常與白血病發(fā)病機(jī)制及預(yù)后的關(guān)系尚不完全明了。本研究的目的在于探討CR

2、LF2基因改變?cè)趦和毙訠淋巴細(xì)胞白血病中的發(fā)生頻率、類(lèi)型，以及與其他基因突變伴隨的情況；同時(shí)結(jié)合患兒臨床預(yù)后資料，揭示CRLF2基因改變對(duì)兒童B-ALL預(yù)后判斷的價(jià)值。
　　方法：2007年6月-2012年1月期間重慶醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院初診的急性 B淋巴細(xì)胞白血病患兒骨髓標(biāo)本(RNA、gDNA、骨髓細(xì)胞懸液等)271例，其中祛除唐氏綜合癥病例。所有遺傳物質(zhì)均在接受化療藥物治療前收集。應(yīng)用RT-PCR方法檢測(cè)所有急性B淋巴細(xì)胞白

3、血病患兒樣本中 CRLF2基因表達(dá)情況，應(yīng)用中位值(median)±10倍標(biāo)準(zhǔn)差(10SDs)來(lái)確定CRLF2是否存在高表達(dá)；通過(guò)PCR擴(kuò)增、測(cè)序來(lái)檢測(cè)急性B淋巴細(xì)胞白血病病例是否存在P2RY8-CRLF2融合基因；檢測(cè)CRLF2基因高表達(dá)和/或存在P2RY8-CRLF2融合基因的病例(發(fā)生CRLF2基因畸變)中CRLF2是否存在點(diǎn)突變，判斷點(diǎn)突變是否會(huì)導(dǎo)致氨基酸序列的改變；FISH檢測(cè)病例中是否存在IGH@-CRLF2異位改變；體外P

4、CR擴(kuò)增所有病例JAK2基因第16、20、21外顯子后測(cè)序，檢測(cè)JAK2突變情況；PCR擴(kuò)增 CRLF2基因高表達(dá)和/或存在 P2RY8-CRLF2融合基因的病例IL7R基因第5、6外顯子后測(cè)序，檢測(cè)IL7R在CRLF2高表達(dá)病例中突變情況；應(yīng)用 Kaplan-Meier分析計(jì)算病例 EFS和 OS,通過(guò) log-rank test比較總體樣本及各危險(xiǎn)分組中不同基因改變EFS、OS的差別；將年齡、性別、初診 WBC、NCI危險(xiǎn)分級(jí)、患兒

5、對(duì)潑尼松的反應(yīng)、CRLF2基因表達(dá)、P2RY8-CRLF2納入多因素分析，揭示CRLF2基因改變對(duì)患兒預(yù)后的意義(所有數(shù)據(jù)均通過(guò)SPSS17.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析)。
　　結(jié)果：⑴50例樣本存在CRLF2高表達(dá)，發(fā)生率為18.45％；27例病例存在P2RY8-CRLF2融合基因，發(fā)生率為9.96%，其中5例既有CRLF2高表達(dá)同時(shí)又存在P2RY8-CRLF2融合基因,22例無(wú)CRLF2高表達(dá)但存在P2RY8-CRLF2融合基因。⑵CRL

6、F2高表達(dá)和/或P2RY8-CRLF2陽(yáng)性病例中未發(fā)現(xiàn)CRLF2 F232突變。⑶未發(fā)現(xiàn)JAK2第16、20、21外顯子突變。⑷CRLF2高表達(dá)及P2RY8-CRLF2陽(yáng)性病例中未發(fā)現(xiàn)IL7R第5、6外顯子突變。⑸生存分析提示總體樣本中CRLF2基因高表達(dá)在EFS和OS中均提示預(yù)后不良，在高危組中同樣是預(yù)后不良；但是在中危組和低危組中不具預(yù)后判斷意義；通過(guò)多因素分析，CRLF2基因高表達(dá)在總體樣本OS中是獨(dú)立的危險(xiǎn)因素，進(jìn)一步在不同危險(xiǎn)

7、分級(jí)中的多因素分析結(jié)果顯示CRLF2基因高表達(dá)可以作為高危組和低危組的危險(xiǎn)因素，但在中危組不均有獨(dú)立的預(yù)后不良預(yù)判價(jià)值。⑹生存分析結(jié)果顯示總樣本中 P2RY8-CRLF2融合基因陽(yáng)性病例均有較差的EFS和OS，在中危組中也提示預(yù)后不良;通過(guò)多因素分析， P2RY8-CRLF2是總體樣本和中危組獨(dú)立的預(yù)后不良因素，但是在低危組中P值處于臨界值附近(OS P=0.057;EFS P=0.048)。
　　結(jié)論：在部分病例中存在P2RY8