利福平致小鼠肝損傷特點(diǎn)的研究及ABCC2基因過(guò)表達(dá)細(xì)胞株的構(gòu)建.pdf

1、背景及目的：
　　最近幾年，結(jié)核病的發(fā)病率較往年有了顯著升高的趨勢(shì)，因結(jié)核造成的死亡率也有了明顯的提高，居各類(lèi)傳染病之首。在世界范圍來(lái)說(shuō)，中國(guó)是結(jié)核病最多的國(guó)家之一[1-2]。在抗結(jié)核病的治療中，抗結(jié)核藥所致的肝損害的發(fā)病率約為2％-28％[3-5]，在抗結(jié)核藥所致的不良反應(yīng)中，肝損害占首位，而重度肝損傷的發(fā)病率約為1％-2％[6-7]，但引起肝毒性的機(jī)制還未明確。因此，我們需要更多的研究，以找到抗結(jié)核藥造成肝損害的機(jī)制。盡量減少

2、抗結(jié)核藥在使用過(guò)程中導(dǎo)致的肝損害，或者尋找新的抗結(jié)核藥。這也是臨床上一直想解決的問(wèn)題。
　　利福平(rifampicin，RIF)是屬于利福霉素類(lèi)的半合成抗生素，它能夠抑制細(xì)菌RNA的合成，可用于肺結(jié)核、腸結(jié)核、結(jié)核性腹膜炎、關(guān)節(jié)結(jié)核等各種結(jié)核桿菌感染，以及腸球菌屬等感染的治療。是常用的抗結(jié)核藥物之一，在臨床上廣泛運(yùn)用。因而，它也成了我國(guó)藥物引起的急性肝損傷的常見(jiàn)的主要原因。利福平有許多副反應(yīng)，肝臟毒性是它最為常見(jiàn)的不良反應(yīng)，長(zhǎng)期

3、使用利福平可引起藥物性肝損傷，因而嚴(yán)重影響了它在臨床上的使用[8-11]。目前對(duì)利福平的肝損傷機(jī)制是不清楚的。在抗結(jié)核過(guò)程中沒(méi)有證據(jù)證明利福平在肝臟代謝當(dāng)中會(huì)出現(xiàn)毒性產(chǎn)物[12]。本文通過(guò)給予小鼠不同劑量的利福平，觀察利福平是否致小鼠肝損傷，以及給予不同劑量的利福平后小鼠肝損傷的特點(diǎn)，為進(jìn)一步探討利福平致肝損傷的機(jī)制奠定基礎(chǔ)。并構(gòu)建ABCC2基因過(guò)表達(dá)細(xì)胞株，為今后研究ABCC2基因，MRP2蛋白的表達(dá)和定位與利福平導(dǎo)致的膽汁淤積的關(guān)系

4、奠定基礎(chǔ)。
　　方法：
　　1.利福平致小鼠肝損傷特點(diǎn)的研究方法:將24只健康雌性ICR小鼠用隨機(jī)數(shù)字法分成4組，每組各6只，分別為對(duì)照組、低、中、高劑量組。每天早上8點(diǎn)半定時(shí)灌胃1次，連續(xù)2周。低劑量組每只小鼠按每天100mg/kg給予利福平;中劑量組每只小鼠按每天200mg/kg給予利福平;高劑量組每只小鼠按每天400mg/kg給予利福平;對(duì)照組:予以等容積的羧甲基纖維素鈉的水溶液，以作對(duì)照。末次給藥后禁食6h取材，收集

5、小鼠血液和肝組織樣品進(jìn)行血清學(xué)檢測(cè)并觀察小鼠肝臟病理改變。
　　2.ABCC2基因過(guò)表達(dá)細(xì)胞株的構(gòu)建:①ABCC2-eGFP定點(diǎn)整合載體構(gòu)建，②電轉(zhuǎn)HEK-293細(xì)胞，篩選陽(yáng)性克隆。
　　結(jié)果：
　　1.各組小鼠間所有肝生化指標(biāo)無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　2.各實(shí)驗(yàn)組小鼠肝臟均發(fā)生明顯病理改變。
　　3.肝HE染色示:各實(shí)驗(yàn)組小鼠肝細(xì)胞排列紊亂，部分肝細(xì)胞腫脹、見(jiàn)空泡狀的細(xì)胞，考慮為不同程度的脂肪變性細(xì)胞，并且

6、在匯管區(qū)周?chē)霈F(xiàn)大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，可見(jiàn)散在的膽汁淤積。其中高劑量組表現(xiàn)最為明顯，出現(xiàn)廣泛的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)及肝細(xì)胞脂肪變性。
　　4.肝電鏡照片示:各實(shí)驗(yàn)組肝臟組織電鏡照片可見(jiàn)肝細(xì)胞包漿中充滿(mǎn)大量的脂肪滴，可見(jiàn)部分細(xì)胞核萎縮，部分毛細(xì)膽管輕微擴(kuò)張、其內(nèi)可見(jiàn)膽汁淤積，部分線(xiàn)粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腫脹斷裂。也是在高劑量組肝臟病理改變最明顯。
　　5.構(gòu)建了ABCC2基因過(guò)表達(dá)細(xì)胞株。
　　結(jié)論：
　　連續(xù)2周給予不同劑量的利福平均