血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)HMC細(xì)胞中SOCS-1和相關(guān)炎癥因子的表達(dá)及荔枝核皂苷的干預(yù)作用研究.pdf

1、目的：
　?。?）通過(guò)體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，探討血管緊張素II(Angiotensin II,AngII)在糖尿病腎病(Diabetic nephropathy,DN)中的作用機(jī)制，明確AngII對(duì)腎小球系膜細(xì)胞（human glomerular mesangial cells,HMC）的增殖及荔枝核皂苷(Saponin of Litchi Seed,SLD)的干預(yù)作用和機(jī)制。
　　（2）明確炎癥因子白介素-1β（IL-1β）、白介

2、素-6（IL-6）在DN發(fā)生發(fā)展中的重要作用。
　?。?）研究細(xì)胞因子信號(hào)抑制因子-1(Suppressor of cytokine signaling-1,SOCS-1)在DN中的地位和作用，明確SOCS-1的表達(dá)可以減輕DN的炎癥反應(yīng)。
　　方法：
　?。?）將 HMC細(xì)胞分為5組：①正常組：正常培養(yǎng)細(xì)胞②AngII10-6mol/ml組③AngII10-7mol/ml組④AngII10-8 mol/ml組⑤空白調(diào)

3、零組：無(wú)細(xì)胞。
　　（2）首先以 MTT比色法進(jìn)行 AngII有效作用濃度的篩選，隨后采用不同濃度SLD（5mg/ml、10mg/ml、20mg/ml）干預(yù)，作用時(shí)間為48h后收集各組細(xì)胞上清液和細(xì)胞。
　?。?）應(yīng)用 MTT比色法檢測(cè) HMC細(xì)胞增殖；酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)（Elisa法）檢測(cè)細(xì)胞上清液中IL-1β、IL-6的含量；運(yùn)用蛋白免疫試驗(yàn)（western blot法）檢測(cè)SOCS-1信號(hào)蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果：

4、>　　（1）MTT法檢測(cè)結(jié)果顯示，AngII作用于 HMC細(xì)胞后，吸光度值（OD值）明顯增加（P<0.05），10-6 mol/ml AngII在48h作用最明顯（P<0.01）。
　?。?）MTT法檢測(cè)結(jié)果顯示，與 AngII組相比，SLD高、中、低劑量組均顯著抑制HMC細(xì)胞的增殖(P<0.01)，其中以SLD高劑量組48h抑制率最高（55.43％）；
　　（3）ELISA法檢測(cè)結(jié)果顯示，與AngII組比較，SLD各劑量組

5、能夠抑制HMC細(xì)胞的IL-1β、IL-6水平(P<0.01或P<0.05)
　　（4）Western Blot結(jié)果顯示，AngII組示SOCS-1的蛋白表達(dá)量升高，明顯高于正常組，差異顯著（P*<0.01）。AngII+SLD組與AngII組比較，蛋白表達(dá)量顯著下降（P*<0.01），但與正常組比較仍然較高。
　　結(jié)論：
　?。?）AngII誘導(dǎo)HMC細(xì)胞增殖的最佳作用濃度為10-6 mol/ml，吸光度值在48小時(shí)作

6、用最明顯。
　?。?）隨著 SLD濃度、時(shí)間的增長(zhǎng)，抑制率也逐漸增加。說(shuō)明 SLD對(duì) HMC細(xì)胞增殖的抑制率與濃度、時(shí)間密切相關(guān)。
　?。?）SLD可使 HMC細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子 IL-6、IL-1β的含量顯著下降，且能抑制HMC細(xì)胞的增殖，可減少細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix,ECM)分泌，從而延緩腎小球硬化的進(jìn)程。
　?。?）AngII可以通過(guò) SOCS-1信號(hào)通路刺激 HMC細(xì)胞炎癥因子的表