乳桿菌屬膽汁鹽水解酶的活性多樣性、底物特異性及相關(guān)基因研究.pdf

1、膽汁鹽水解酶水解不同的膽汁鹽會(huì)對(duì)人體產(chǎn)生不同的作用，水解初級(jí)膽汁鹽會(huì)增加次級(jí)膽酸的產(chǎn)生，水解牛磺酸膽汁鹽會(huì)游離出?；撬幔M(jìn)而增加硫化物的產(chǎn)生。而水解次級(jí)膽汁鹽和甘氨酸膽汁鹽則不會(huì)產(chǎn)生上述危害作用。而目前在篩選益生菌，評(píng)價(jià)益生性的實(shí)驗(yàn)中，很少考慮到益生菌對(duì)不同膽汁鹽水解的不同效果，絕大多數(shù)研究只采用一種或兩種膽汁鹽來考察膽汁鹽水解酶活性，而且對(duì)膽汁鹽水解酶有害的方面缺乏研究，也不清楚不同種乳桿菌膽汁鹽水解酶對(duì)六種不同人膽汁鹽的水解效率方面

2、的差別，所以目前對(duì)不同種乳桿菌的膽汁鹽水解酶的研究還不夠充分，增加對(duì)不同種乳桿菌膽汁鹽水解酶差別的了解，特別是底物特異性方面的認(rèn)識(shí)會(huì)對(duì)益生菌的篩選工作提供重要的參考和依據(jù)，同時(shí)也是進(jìn)一步確定膽汁鹽水解酶對(duì)菌株、對(duì)宿主的功能和作用的重要判斷依據(jù)。在本實(shí)驗(yàn)中，我們定量測(cè)定了8個(gè)種共16 株乳桿菌對(duì)于模擬人膽汁鹽的膽汁鹽水解酶比酶活并進(jìn)一步測(cè)定了16 株乳桿菌對(duì)六種人膽汁單鹽(GC，GDC，GCDC，TC，TCDC和TDC)的膽汁鹽水解酶比酶

3、活。 本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，8種乳桿菌各有特點(diǎn)，其中首次發(fā)現(xiàn)L.helveticus、L.fermentum和 L.galllinarum 只具有?；撬崮懼}水解活力而不具有甘氨酸膽汁鹽水解活力，這說明這三種膽汁鹽水解酶只識(shí)別氨基酸側(cè)鏈而不受類固醇核心的影響。這個(gè)新發(fā)現(xiàn)進(jìn)一步證實(shí)了微生物的膽汁鹽水解酶不僅能夠識(shí)別固醇側(cè)鏈而且能夠識(shí)別氨基酸側(cè)鏈。在八種乳桿菌中，L.acidophilus具有最高的模擬人膽汁鹽和GC、GDC、GCDC、

4、TCDC、TDC的水解能力，L.acidophilus 對(duì)于甘氨酸膽汁鹽的水解活力比?；撬崮懼}的水解活力高10 倍以上，并且四株 L. Acidophilus菌株對(duì)模擬人膽汁鹽的水解活力相差很大，比酶活范圍從336.5 Umg-1到 776.4Umg-1，相差一倍以上。與 L.acidophilus 不同，L.plantarum菌株間膽汁鹽水解酶的比酶活相差不大，而且L.plantarum菌株對(duì)于不同人膽汁單鹽的水解活力也沒

5、有明顯差別。L.gasseri Am1 表現(xiàn)出了最高的TC 降解能力，L.gasseri的膽汁鹽水解酶活性受到膽汁鹽氨基酸側(cè)鏈和類固醇核心的共同影響。 L.casei和L.salivarius菌株沒有表現(xiàn)出任何膽汁鹽水解酶活性。我們還發(fā)現(xiàn)，相比在MRS培養(yǎng)基中，L.gasseri和 L.acidophilus的膽汁鹽水解酶活力在MRSB 培養(yǎng)基中出現(xiàn)了很大程度的下降(最大下降 80％)，而其他菌株則沒有出現(xiàn)類似的下降。 L.g

6、asseri和 L.acidophilus的膽汁鹽水解酶活性遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于其他菌株，之前有研究表明膽汁鹽的存在能影響酶活力，這其中是否存在必然的聯(lián)系還有待于進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)和證實(shí)。不同膽汁鹽水解酶基因的比對(duì)表明LA-bshA，LA-bshB，LG-bsh和 LP-bsh1具有高的相似度(高于45％)，LP-bsh2，LP-bsh3和 LP-bsh4 同其他膽汁鹽水解酶基因(LA-bshA，LA-bshB，LG-bsh and LP-bsh1)