基于量子點(diǎn)熒光探針的腫瘤標(biāo)志物GP73和腺苷的分析方法研究.pdf

1、量子點(diǎn)(quantum dots，QDs)又稱半導(dǎo)體納米晶，與傳統(tǒng)熒光染料相比有很多獨(dú)特的優(yōu)良性質(zhì)，如熒光量子產(chǎn)率高、吸收光譜寬、發(fā)射光譜窄而對(duì)稱、斯托克斯位移大、耐光漂白等。作為一種新型的納米熒光探針，QDs在生物組織成像、免疫分析等方面顯示了廣闊的應(yīng)用前景。但是在生物分子檢測(cè)中，QDs與不同的物質(zhì)會(huì)發(fā)生非特異性吸附，其熒光信號(hào)容易被樣品中的各種雜質(zhì)干擾，從而影響靶物質(zhì)的檢測(cè)。而生物樣品的背景熒光干擾也會(huì)降低QDs檢測(cè)的靈敏性。因此，

2、如何提高QDs熒光探針檢測(cè)生物分子的特異性和靈敏度，仍是需要研究的問題。本文利用QDs分別發(fā)展了一種新型熒光免疫探針和離子交換熒光信號(hào)放大方法，并分別將其應(yīng)用于腫瘤標(biāo)志物高爾基體糖蛋白73(golgi protein-73，GP73)和腺苷的牛物分析中，以提高QDs熒光探針的特異性和靈敏度。主要研究?jī)?nèi)容包括：
　?、臛P73作為一種新型肝癌診斷的標(biāo)志物，在正常人肝組織中很少表達(dá)，而在慢性肝臟疾病中，患者血清GP73含量升高，特別是

3、在早期肝細(xì)胞性肝癌表現(xiàn)得尤為顯著。大量研究發(fā)現(xiàn)，對(duì)于早期肝癌的診斷，GP73的敏感性要優(yōu)于肝癌的另一血清標(biāo)志物甲胎蛋白(Alpha-fetoprotein，AFP)。臨床上檢測(cè)GP73的方法只有酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)，但是該方法操作復(fù)雜，費(fèi)時(shí)較長(zhǎng)。因此建立快速、簡(jiǎn)便地檢測(cè)血清中GP73的方法非常重要。本文以GP73為目標(biāo)分析物，利用Mn修飾CdTe/CdS QDs標(biāo)記GP73抗體，然后與蛋白質(zhì)A/G瓊脂糖微珠結(jié)合形成新型的免疫熒光探針，用于特

4、異性地檢測(cè)血清樣品中的GP73?；贕P73對(duì)QDs-GP73抗體-蛋白質(zhì)A/G瓊脂糖微珠免疫探針的熒光猝滅作用，我們建立了一種簡(jiǎn)單、快速、低成本測(cè)定GP73的方法。在最優(yōu)條件下，當(dāng)GP73濃度在20-150 ng mL-1范圍內(nèi)，上述免疫熒光探針與GP73濃度呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)為0.9935，檢測(cè)限（3(6)/K）為10 ng mL-1。
　?、芉Ds納米粒子由于其獨(dú)特的金屬組成成分，被廣泛地應(yīng)用于各種信號(hào)放大免疫技術(shù)中

5、。在本研究中，我們利用QDs納米粒子發(fā)展了一種新型的離子交換熒光信號(hào)放大體系。首先利用適配體片段1(target binding aptamer1，TBF1)結(jié)合的Fe3O4磁性納米粒子作為分離工具，適配體片段2(target binding aptamer2，TBF2)結(jié)合的CdTe QDs作為檢測(cè)探針，在靶物質(zhì)的存在下，形成Fe3O4-TBF1-target-QDs-TBF2三明治結(jié)構(gòu)體系。磁性分離后，加入一定量過量的Ag+作為離子

6、交換溶液，由于三明治結(jié)構(gòu)中的QDs含有Cd2+，AgTe相比于CdTe更具有熱力學(xué)穩(wěn)定性，因此在常溫下Ag+就能夠快速地將Cd2+置換出來，將QDs完全破壞。再經(jīng)磁性分離后，上清液中剩余的Ag十可以定量地反映出三明治結(jié)構(gòu)中結(jié)合的QDs的濃度，從而得到靶物質(zhì)的濃度。而上清液中剩余的Ag+濃度可以通過CdTe QDs進(jìn)行檢測(cè)，因此具有很高的靈敏性和準(zhǔn)確性。該方法不需要使用其它昂貴的熒光檢測(cè)探針，操作簡(jiǎn)單，快速且靈敏度高。我們將該方法應(yīng)用于腫