姜黃素對(duì)慢性低氧下肺血管重塑的影響及作用機(jī)制.pdf

1、目的：在慢性低氧誘導(dǎo)肺血管重塑過(guò)程中觀察肥大細(xì)胞的激活情況，探討姜黃素是否可通過(guò)抑制肥大細(xì)胞活性改善肺血管重塑。
　　方法：
　　從溫州醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，購(gòu)得180g～200gSD(Sprague-Dawley)雄性大鼠24只，隨機(jī)分為四組:Ⅰ組（正常對(duì)照組），Ⅱ組（低氧模型組），Ⅲ組（色甘酸鈉對(duì)照組），Ⅳ組（姜黃素實(shí)驗(yàn)組）。將后3組動(dòng)物放入常壓低氧艙中，吸入氧濃度為8％～11％，持續(xù)每天8h，每周6d，連續(xù)4周。Ⅲ組給

2、予色甘酸鈉以20mg/kg體重腹腔注射處理，Ⅳ組給予姜黃素混懸液按150mg/kg體重灌胃處理，Ⅰ組、Ⅱ組則給予同等劑量生理鹽水灌胃處理。HE染色后，光鏡下觀察肺細(xì)小血管，利用圖像分析系統(tǒng)(IPP6.0)測(cè)定肺細(xì)小動(dòng)脈管壁/管總面積(vessel wallarea/total area，WA/TA)、管腔/管總面積(vessel cavity area/total area，CA/TA)。透射電鏡下觀察肺小動(dòng)脈壁周圍肥大細(xì)胞及血管壁膠原

3、增生情況、平滑肌細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞。甲苯胺藍(lán)染色后，光鏡下觀察，肺細(xì)小血管周圍甲苯胺藍(lán)染色陽(yáng)性肥大細(xì)胞，計(jì)數(shù)各個(gè)視野中肥大細(xì)胞細(xì)胞數(shù)(the number of mast cell，NMC)，肥大細(xì)胞均數(shù)=每組肥大細(xì)胞總數(shù)/所取視野數(shù);肥大細(xì)胞脫顆粒率(degranulation rate，DR)=脫顆粒肥大細(xì)胞數(shù)/肥大細(xì)胞總數(shù)。每張免疫組化切片隨機(jī)選取5個(gè)含肺細(xì)小動(dòng)脈高倍鏡視野，計(jì)數(shù)每個(gè)視野中陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)。各實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((x)±

4、s)表示，樣本均數(shù)間比較采用方差分析，全部數(shù)據(jù)經(jīng)SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理。
　　結(jié)果：
　　1、大鼠肺小動(dòng)脈顯微和超微結(jié)構(gòu)觀察
　　肺組織經(jīng)HE染色光鏡下觀察，模型組相比正常對(duì)照組肺細(xì)小動(dòng)脈管壁明顯增厚，平滑肌細(xì)胞增生，內(nèi)彈力板扭曲明顯，管腔狹窄，同時(shí)模型組相比正常對(duì)照組管壁/管總面積(WA/TA)明顯增高(P＜0.05)、管腔/管總面積(CA/TA)明顯降低(P＜0.05);電鏡下，正常對(duì)照組血管結(jié)構(gòu)正常，平

5、滑肌細(xì)胞及膠原未增生，內(nèi)彈力板自然彎曲，內(nèi)皮細(xì)胞扁平;模型組肺細(xì)小動(dòng)脈間隙膠原纖維增生、密集，中膜平滑肌細(xì)胞增生，內(nèi)彈力板扭曲，內(nèi)皮細(xì)胞收縮突起;提示慢性低氧性肺血管重塑模型建造成功。
　　光鏡下，色甘酸鈉組、姜黃素組相比模型組肺動(dòng)脈管壁較薄，平滑肌細(xì)胞增生較少，內(nèi)彈力板自然彎曲，管腔未見(jiàn)明顯狹窄，同時(shí)兩用藥組WA/TA明顯低于模型組(P＜0.05)、CA/TA明顯高于模型組(P＜0.05)，提示藥物干預(yù)有效，姜黃素可以改善慢性低

6、氧性肺動(dòng)脈高壓肺血管重塑;兩用藥組相比正常對(duì)照組的WA/TA、CA/TA差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，提示藥物干預(yù)效果尚不完全;兩藥物WA/TA、CA/TA差異不明顯(P＞0.05)，提示藥效相近;電鏡下，色甘酸鈉組、姜黃素組相比模型組管壁膠原增生明顯減輕，沉積較少，管壁平滑肌細(xì)胞增生同樣減輕，內(nèi)皮細(xì)胞僅輕度收縮突起，內(nèi)彈力板輕度扭曲。
　　2、肥大細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)觀察
　　電鏡下，正常對(duì)照組肺小動(dòng)脈周圍肥大細(xì)胞內(nèi)含豐富圓形

7、顆粒，胞膜完整;模型組肺小動(dòng)脈周圍肥大細(xì)胞數(shù)量增多，胞內(nèi)顆粒稀疏，胞膜內(nèi)陷;色甘酸鈉組、姜黃素組肺小動(dòng)脈周圍肥大細(xì)胞胞膜較完整，胞內(nèi)圓形顆粒較多。表明姜黃素可以抑制慢性低氧下肺血管周圍肥大細(xì)胞脫顆粒。
　　3、肥大細(xì)胞甲苯胺藍(lán)染色
　　顯微鏡下觀察可見(jiàn)肺細(xì)小動(dòng)脈周圍肥大細(xì)胞內(nèi)粗大顆粒染成紫紅色，未脫顆粒細(xì)胞胞膜完整，胞漿染色加深，脫顆粒細(xì)胞形態(tài)不規(guī)整，胞漿淡染。模型組相比正常對(duì)照組肺細(xì)小動(dòng)脈周圍肥大細(xì)胞數(shù)量(NMC)明顯增多

8、(P＜0.05)，脫顆粒率(DR)增高(P＜0.05);色甘酸鈉組、姜黃素組相比模型組NMC較少(P＜0.05)，DR降低，表明姜黃素可以抑制慢性低氧下肺血管周圍肥大細(xì)胞脫顆粒;姜黃素組的NMC、DR值相比色甘酸鈉組未明顯增高(P＞0.05)，正常對(duì)照組的NMC、DR值與兩干預(yù)組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　4、肥大細(xì)胞類胰蛋白酶(TBS)免疫組化檢測(cè)
　　光鏡下可見(jiàn)，正常對(duì)照組的肺細(xì)小動(dòng)脈周圍肥大細(xì)胞胞漿染成

9、棕黃色，模型組相比正常對(duì)照組肺細(xì)小動(dòng)脈周圍肥大細(xì)胞細(xì)胞數(shù)即TBS陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯增多(P＜0.05)，提示慢性低氧誘導(dǎo)肺細(xì)小動(dòng)脈周圍結(jié)締組織型肥大細(xì)胞增生;色甘酸鈉組、姜黃素組相比模型組陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯減少(P＜0.05)，提示色甘酸鈉、姜黃素可以抑制慢性低氧下肺細(xì)小動(dòng)脈周圍結(jié)締組織型肥大細(xì)胞的增生;姜黃素組的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)相比色甘酸鈉組未明顯增多(P＞0.05)，正常對(duì)照組的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)與兩干預(yù)組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。