新型磷脂微乳電動色譜法的建立及其在預測藥物皮膚滲透性中的應用.pdf

1、微乳電動色譜(MEEKC)是使用微乳液作為分離介質(zhì)的一種電泳技術，具有適用范圍廣、分離速度快、試樣消耗少的獨特優(yōu)勢，已廣泛用于分離科學領域，同時由于微乳液滴具有類細胞膜結(jié)構的有序親水和疏水區(qū)，藥物在微乳液滴中的分配可在一定程度上模擬其在生物膜上的被動擴散過程，因此微乳與色譜技術結(jié)合，還可以用于藥物與細胞膜的相互作用研究。但目前應用于毛細管電動色譜系統(tǒng)的微乳體系主要是以十二烷基硫酸鈉為表面活性劑構成的，其組成與細胞膜成分相差懸殊。本課題擬

2、使用磷脂類生物表面活性劑制備新型微乳體系，通過不同化合物集合的定量保留-結(jié)構關系研究，闡明該類微乳電動色譜的溶質(zhì)保留機制，篩選可用于皮膚滲透性評價的微乳體系，建立定量保留-皮膚滲透性關系，探討MEEKC作為高通量藥物膜通透性篩選工具的應用價值。具體研究內(nèi)容如下:
　　第一部分 MEEKC中微乳體系的制備及溶質(zhì)保留因子重現(xiàn)性的考察
　　目的:以大豆磷脂為主要表面活性劑，制備出適用于微乳電動色譜法使用的穩(wěn)定的微乳體系，并通過測定

3、系列化合物的溶質(zhì)保留因子在不同批次微乳體系下的批間重復性和同批次微乳體系下的日間重復性，考察溶質(zhì)保留因子測定結(jié)果的重現(xiàn)性。
　　方法:1主要以大豆磷脂、十二烷基硫酸鈉、膽酸鈉為表面活性劑，正丁醇為助表面活性劑，磷酸鹽緩沖液為水相，選擇不同的油相，通過制作偽三相圖的方法，確定微乳各組成的比例。通過粒度和Zeta電位參數(shù)的測定對微乳的微觀結(jié)構性質(zhì)進行表征,并考察不同pH條件和室溫放置不同時間后微乳粒徑和Zeta電位的變化。2用相同組成

4、相同制備方法制備了三批微乳液，以化合物硫脲、鄰甲苯胺、2-萘酚以及電滲流標記物二甲基亞砜(DMSO)和微乳標記物十二烷基苯的混合溶液作為測試溶液，測定溶質(zhì)保留時間和保留因子的批間重復性。使用同一批次微乳液連續(xù)測定三天，考察日間重復性。
　　結(jié)果:1制備了7種微乳體系，其粒徑范圍在4.14-15.9 nm，Zeta電位范圍在-12--40.5 mv之間。在其他組成不變的情況下，油相種類的改變對微乳的粒徑和Zeta電位沒有明顯影響。微

5、乳液在室溫下放置一個月以及在pH值3-10范圍內(nèi)，外觀及粒徑無明顯變化。2以組成為1.56％SP-1.5％ SDS-7.5％丁醇-0.85％庚烷-0.16％乙腈-88.43％磷酸鹽緩沖液(20 mM磷酸二氫鈉緩沖液，微乳pH9.2)的微乳液作為背景流動相，測得各溶質(zhì)保留時間的批間重復性RSD在0.36％-0.81％范圍內(nèi)，日間重復性RSD在3.5％-5.8％，保留因子的批間重復性RSD在1.0％-1.6％范圍內(nèi)，日間重復性RSD在0.7

6、％-3.0％。
　　結(jié)論:1成功制備出7種穩(wěn)定的磷脂微乳體系，為MEEKC的應用研究打下了基礎。2溶質(zhì)保留時間在不同批次微乳的電動色譜中重現(xiàn)性良好，而在同一批次微乳電動色譜中日間重現(xiàn)性不太理想，但由于每個樣品都隨行DMSO和十二烷基苯進樣，各被測物容量因子的批間及日間重復性均良好。
　　第二部分微乳電動色譜溶質(zhì)保留機制分析及預測藥物皮膚滲透性的微乳體系選擇
　　目的:將第一部分制備出的7種微乳體系用于電動色譜后的溶質(zhì)保

7、留行為進行線性溶劑化參數(shù)模型分析，揭示化合物與微乳擬生物膜相互作用的分子機制，并通過與皮膚滲透過程的線性溶劑化特征參數(shù)比較，選擇出適合預測藥物皮膚滲透性系數(shù)(logKp)的微乳體系。
　　方法:收集足夠量且具有不同結(jié)構特征的化合物集合，進行MEEKC保留因子的測定。將測得的容量因子與化合物的分子描述符做多元線性回歸方程，得到線性溶劑化方程，從方程系數(shù)解析各種分子間作用力在溶質(zhì)分配過程中的貢獻。然后再將各系統(tǒng)方程的系數(shù)進行標準化處理

8、，比較不同系統(tǒng)中溶質(zhì)保留行為的相近性。
　　結(jié)果:收集了26個具有Abraham描述符的小分子芳香族化合物，在所制備的7種微乳體系下測得保留因子，得到7個微乳電動色譜體系的線性溶劑化方程。溶劑化參數(shù)模型分析結(jié)果表明溶質(zhì)的體積和氫鍵堿性在MEEKC保留中影響最大。磷脂微乳相比于SDS微乳體系的變化是磷脂微乳體系的氫鍵堿度(a)增加，體系內(nèi)聚能(v)及其與溶質(zhì)間的n或π電子作用(e)減弱。皮膚滲透過程與微乳系統(tǒng)ME1、ME5、ME7的

9、線性溶劑化方程系數(shù)間的矢量距離都比較短，但由于ME7系統(tǒng)的樣品出峰情況和基線穩(wěn)定性都比較好，故選擇ME7體系模擬藥物的皮膚滲透過程。
　　結(jié)論:磷脂微乳電動色譜體系下的溶質(zhì)保留特征與其他色譜體系有一定的類似性，即溶質(zhì)的體積和氫鍵堿性對保留影響最大，但影響程度與其他體系不同;磷脂微乳與SDS微乳體系在線性溶劑化能量關系方面有所不同，主要表現(xiàn)在a值升高，v和e值下降。通過文獻報道的皮膚滲透性系數(shù)的線性溶劑化方程特征，尋找到可能模擬藥物

10、皮膚滲透過程的微乳電動色譜體系為2％ SP-3.5％膽酸鈉-6％正丁醇-0.7％辛醇-87.8％磷酸鹽緩沖溶液(20 mM磷酸二氫鈉緩沖溶液)。
　　第三部分磷脂微乳電動色譜用于藥物皮膚滲透性系數(shù)和正辛醇-水分配系數(shù)的預測
　　目的:以皮膚滲透系數(shù)(logKp)和正辛醇-水分配系數(shù)(logP)為目標函數(shù)，建立MEEKC保留因子（1ogk)與logKp值及l(fā)ogP值的相關性方程，探討MEEKC法在藥物logKp和logP值預測

11、方面的應用價值。
　　方法:收集已知logKp和logP值的藥物，應用微乳ME7體系，在pH7.4條件下測定了34種藥物的logk值，分別與logKp和logP做相關研究，分析適用于MEEKC預測logKp和logP值的藥物集合，建立相關預測模型，并進行驗證。
　　結(jié)果:34種藥物的logk值與logP值之間有較好的線性相關(y=1.9124x+1.2263，R2=0.7635，n=34)，但與logKp值之間無明顯相關。將

12、藥物分為酸、中、堿性集合后分析，發(fā)現(xiàn)酸性、中性和堿性藥物的logP值與logk值之間均能建立很好的相關性，以中性化合物結(jié)果最好(y=1.6595x+1.0705，R2=0.9393，n=7)，而只有堿性藥物的logKp值與logk值之間能建立相對較好的相關性(y=2.1377x-6.7621，R2=0.7692，n=16)。引入其他理化參數(shù)后可進一步提高預測模型的準確度:logKp=-6.329-0.184MW/100+2.376 lo