YAP與P-YAP在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)與其臨床生物學(xué)行為關(guān)系的研究.pdf

1、目的:肝細(xì)胞癌(HCC，hepatocellular carcinoma)是肝臟原發(fā)腫瘤中最常見的類型，也是我國乃至全世界，最常見的惡性腫瘤疾病之一。通常HCC被發(fā)現(xiàn)時患者已進(jìn)入晚期，常規(guī)化療對其作用不明顯，致使生存率較其它癌癥顯著降低。因此，加強(qiáng)對HCC的發(fā)病機(jī)制研究，尋找更多關(guān)于肝癌基因及抑癌基因的表達(dá)并明確其與HCC的關(guān)系已成為當(dāng)前研究的重要方向。
　　Hippo通路在促進(jìn)細(xì)胞凋亡，限制細(xì)胞增殖，調(diào)控器官分化方面起著重要的作

2、用。YAP(Yes-associated protein)即Yes相關(guān)蛋白，作為該通路下游的效應(yīng)因子，多以磷酸化形式(P-YAP)參與細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)以調(diào)控細(xì)胞凋亡與增殖的平衡。在病理狀態(tài)下，被阻斷或失活的Hippo通路對YAP磷酸化作用失效致YAP自身活性增強(qiáng)使細(xì)胞增生和凋亡間平衡失調(diào)、組織器官過度生長及腫瘤發(fā)生。國內(nèi)外相關(guān)研究表明，YAP作為新近發(fā)現(xiàn)的癌基因，參與胃癌、結(jié)腸癌、肺癌等多種腫瘤的形成和發(fā)展。但YAP、P-YAP在肝細(xì)胞肝癌

3、組織中的表達(dá)情況及意義報道還不多見。本課題以原發(fā)肝細(xì)胞肝癌患者為研究對象，應(yīng)用常規(guī)病理免疫組化技術(shù)、蛋白印跡(Western blot)技術(shù)檢測YAP，P-YAP在肝細(xì)胞癌組織、癌旁肝硬化組織及正常肝組織中的表達(dá)情況，從基礎(chǔ)與臨床相結(jié)合角度分析其表達(dá)意義，研究了YAP表達(dá)與患者年齡、腫瘤大小、AFP水平、病理分級、血管侵犯情況及TNM分期的關(guān)系，進(jìn)而推測YAP在肝細(xì)胞肝癌發(fā)生發(fā)展中的重要功能及意義，為肝癌的發(fā)生和診治提供一定依據(jù)。

4、>　　方法:收集唐山市工人醫(yī)院肝膽外科2012年8月至2014年7月間具有完整臨床及病理資料的78例肝細(xì)胞肝癌根治性切除術(shù)的標(biāo)本。所取標(biāo)本一式兩份，一份用中性福爾馬林固定置備石蠟切塊供HE染色和免疫組化使用，一份留取新鮮組織供Western blot備檢。HE染色，鏡下觀察三種組織標(biāo)本的病理變化;應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色SP法檢測YAP、P-YAP在三種組織中的表達(dá)情況;從冷凍組織中提取蛋白，用Western blot方法檢測各組標(biāo)本中YA

5、P、P-YAP蛋白的表達(dá)情況;卡方檢驗分析YAP與HCC患者年齡、腫瘤大小、病理分級、轉(zhuǎn)移情況及TNM分期的關(guān)系;Pearson相關(guān)分析對各組中YAP、P-YAP蛋白的表達(dá)關(guān)系進(jìn)行相關(guān)分析。
　　結(jié)果:
　　1 HE染色
　　正常肝組織內(nèi)肝小葉結(jié)構(gòu)清晰，肝細(xì)胞排列緊密有序呈索狀，可見中央靜脈及多處毛細(xì)血管竇;肝硬化組織中肝小葉正常結(jié)構(gòu)被破壞，肝細(xì)胞排列紊亂且體積增大，細(xì)胞核大且深染，纖維組織增多，可見較多炎性細(xì)胞;肝癌

6、組織失去正常肝小葉結(jié)構(gòu)，癌細(xì)胞體積增大，異形性明顯，大小形態(tài)極不一致，胞核明顯變大、嗜堿性增強(qiáng)，可見多核及異型核，毛細(xì)血管竇擴(kuò)張。
　　2免疫組織化學(xué)法染色結(jié)果顯示
　　正常肝組織的細(xì)胞質(zhì)中P-YAP表達(dá)強(qiáng)陽性，肝硬化組織胞質(zhì)內(nèi)弱陽性表達(dá)，而肝癌組織中幾乎無表達(dá);而與P-YAP相反，YAP在肝癌組織的細(xì)胞核及胞漿中呈深棕黃色的強(qiáng)陽性表達(dá)，在肝硬化組織胞核及胞漿中棕黃色陽性表達(dá)，正常肝組織內(nèi)無細(xì)胞核表達(dá)。
　　3 Wes

7、tern blot法檢測結(jié)果顯示
　　正常肝組織內(nèi)P-YAP蛋白的表達(dá)明顯高于肝癌組織，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義;而伴隨著正常組織到肝癌的演變，YAP蛋白表達(dá)依次升高，在肝癌組織中的表達(dá)顯著高于肝硬化和正常肝組織，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　4癌組織內(nèi)YAP的表達(dá)與AFP水平、病理分級、血管侵犯情況及TNM分期相關(guān)，與患者年齡及腫瘤大小無明顯相關(guān)性。
　　5 P-YAP蛋白表達(dá)量隨YAP蛋白表達(dá)量的增高而下降，兩者呈負(fù)相關(guān)。<

8、br>　　結(jié)論:
　　1 YAP在HCC患者中強(qiáng)陽性表達(dá)，且與AFP水平、病理分級、血管侵犯情況及TNM分期相關(guān)，與患者年齡及腫瘤大小無明顯相關(guān)性，提示其可能在肝細(xì)胞癌的發(fā)生、發(fā)展起重要的作用;
　　2肝硬化組織和肝癌組織中P-YAP蛋白表達(dá)量隨YAP蛋白表達(dá)量的增高而下降，兩者呈負(fù)相關(guān)。
　　3 P-YAP在正常肝細(xì)胞胞漿內(nèi)表達(dá)，去磷酸化后YAP在HCC患者胞核內(nèi)表達(dá)，可能提示了病理狀態(tài)下，YAP磷酸化失效，致使去磷