Wnt通路抑制劑Wnt-C59對病理性心肌肥大治療作用的研究.pdf

1、研究背景:
　　心血管疾病嚴重威脅著當今中國人民健康，隨著人們生活質量的提高，其患病率也呈快速上升趨勢。病理性心肌肥大是多種心血管疾病的重要病理基礎，負荷增加、炎癥刺激、激素異常分泌等外界因素均可導致心肌病理性肥大。如高血壓使心臟的后負荷增加可導致心肌肥大。病變早期心臟代償性向心肥大，心肌收縮力增強，使心輸出量維持到正常水平。若病理刺激長期存在，心肌肥大持續(xù)加重將導致心臟失代償，出現離心性肥大，心肌細胞凋亡數目增加且逐漸被成纖維細

2、胞取代，心室壁由厚變薄，心肌收縮力下降，最后可導致嚴重的心律失常和心力衰竭。抑制心肌肥大進程可有效的改善心功能，提高心血管病患者的生活質量。目前的研究認為，致病理性心肌肥大的主要機制有交感神經系統(tǒng)亢進、RAAS系統(tǒng)的激活等。針對這些機制臨床上使用的藥物主要有:β-受體阻滯劑(β-blocker)、血管緊張素轉化酶抑制劑(ACEI)以及血管緊張素受體阻滯劑(ARB)。盡管這些藥物對心肌肥大有一定的治療效果，但其作用效果有限，尚不能完全阻斷

3、病理性心肌肥大的發(fā)展，能否逆轉心肌肥大也存在爭議，故新型抗心肌肥大藥物亟需開發(fā)和應用。
　　近年來，大量研究表明Wnt通路的激活參與了病理性心肌肥大的發(fā)生，阻斷Wnt通路有可能成為治療病理性心肌肥大的新靶點。但目前尚未報道有Wnt通路的阻滯劑被用于治療心肌肥大的研究。
　　Wnt通路有經典通路和非經典通路之分，兩條通路均參與了病理性心肌肥大的進程。經典通路主要通過其下游的β-catenin入核來誘導肥大基因的表達，而非經典通

4、路主要通過其下游的信號分子NFAT入核來誘導肥大基因的表達。常用的Wnt通路抑制劑（sFRPs、DDKs）通常只阻斷單一經典通路，由于經典和非經典Wnt通路在心肌肥大發(fā)生過程中均被激活，我們假設非選擇性地抑制這兩條信號通路將達到更佳的抗心肌肥大作用。Wnt-C59可以選擇性抑制MBOAT家族的Porcupine酶，從而減弱其介導的Wnt蛋白棕櫚?；饔?，從而抑制哺乳動物所有Wnt蛋白的激活，所以其具備同時阻斷經典和非經典Wnt通路的作用

5、。在抑制腫瘤增殖的實驗中，Wnt-C59已經發(fā)揮了顯著的治療作用。本研究從細胞和動物實驗兩個層面研究Wnt-C59對病理性心肌肥大的治療作用，并通過對經典和非經典Wnt通路中多個信號分子的檢測來驗證Wnt-C59的阻斷效果，進而為Wnt-C59的臨床應用奠定理論基礎。
　　研究方法:
　　1.a.給予C57/BL6J小鼠實施主動脈縮窄術(TAC)誘導其病理性心肌肥大，使用Wnt-C59進行干預后觀察心肌組織蓬亂蛋白(DVL-

6、1)的mRNA表達量、小鼠體重、心功能、心臟質量指數（心臟質量/體重）、心肌細胞橫截面積以及心肌細胞凋亡等指標。
　　b.給予大鼠乳鼠心肌細胞(NRVM)血管緊張素Ⅱ(Ang-Ⅱ)刺激誘導細胞水平的病理性心肌肥大，使用Wnt-C59干預后觀察心肌細胞DVL-1的mRNA表達量、心肌細胞表面積。
　　2.在細胞實驗中，用免疫熒光染色觀察β-catenin入核，用Q-PCR檢測Wnt信號通路與心肌肥大相關的靶基因C-myc和Cy

7、clin-D1的表達量。
　　3.在細胞實驗中用免疫熒光染色觀察轉錄因子NFAT入核，用Q-PCR檢測心肌肥大關聯基因ANF、α-actin、β-MHC的表達量。
　　研究結果:
　　1.Wnt-C59明顯減輕由TAC誘導的小鼠心肌肥大，明顯減輕Ang-Ⅱ誘導的NRVM肥大。
　　2.Wnt-C59對TAC誘導的心功能降低、心肌細胞凋亡增加等有顯著的拮抗作用。
　　3.外界的致肥大刺激可通過Wnt-β-ca

8、tenin經典通路以及Wnt/Ca2+非經典通路的激活使心肌細胞發(fā)生肥大;Wnt-C59干預可阻斷兩條通路中關鍵轉錄因子β-catenin以及NFAT的入核，從而發(fā)揮抑制病理性心肌肥大的作用。
　　研究結論:
　　Wnt-C59通過抑制經典和非經典Wnt信號通路，阻斷心肌細胞內β-catenin和NFAT的入核，下調C-myc、Cylin-D1、ANF、α-actin、β-MHC等肥大關聯基因的表達，繼而發(fā)揮抑制病理性心肌肥