探討FetuinA、MGP通過調(diào)控NF-KB通路對磷酸鈣晶體誘導HK-2表達及釋放MCP-1、TGF-β的抑制作用.pdf

1、目的:探討FetuinA、MGP通過抑制NF-KB通路對磷酸鈣晶體誘導HK-2表達及釋放MCP-1、 TGF-β的調(diào)控作用。
　　方法:1、采用100ug/mlCaP刺激HK-2，于刺激后1、3、6、24、48、72h提取各組細胞總RNA, RT-PCR分別檢測細胞于(1、3、6h)NF-KB mRNA及MCP-1mRNA、(24、48、72h)TGF-βmRNA表達水平。2、分別采用100ug/mlCaP+50mmol/L PD

2、TC、100ug/mlCaP+100mmol/L PDTC、100ug/mlCaP+200mmol/L PDTC刺激HK-2,于(6、72h)提取細胞總RNA,RT-PCR分別檢測細胞于6h MCP-1mRNA及72hTGF-βmRNA表達水平。3.分別采用100ug/mlCaP+1000ng/mlFetuinA、100ug/mlCaP+2500ng/mlFetuinA、100ug/mlCaP+5000ng/mlFetuinA、100u

3、g/mlCaP+2000ng/mlMGP、100ug/mlCaP+4000ng/mlMGP、100ug/mlCaP+6000ng/mlMGP刺激HK-2，于刺激后3h提取各組細胞總RNA, RT-PCR分別檢測細胞于3h NF-KB mRNA表達水平。4、采用100ug/ml CaP刺激HK-2，于刺激后1、3、6、24、48、72h收集細胞培養(yǎng)液;分別采用100ug/ml CaP+50mmol/L PDTC、100ug/ml CaP+

4、100mmol/L PDTC、100ug/ml CaP+200mmol/L PDTC刺激HK-2，于刺激后6、72h收集細胞培養(yǎng)液， ELISA法檢測MCP-1、 TGF-β含量。
　　結(jié)果:1、100ug/ml CaP HK-2組，NF-KBmRNA、MCP-1mRNA、TGF-β mRNA表達均高于正常對照HK-2，其中NF-KBmRNA表達于3h達高峰，MCP-1mRNA表達于6h達高峰，TGF-βmRNA表達于72h達高峰

5、，與對照組比較，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。2、100ug/mlCaP+50mmol/LPDTC、100ug/mlCaP+100mmol/L PDTC、100ug/mlCaP+200mmol/L PDTC組HK-2 MCP-1mRNA、TGF-β mRNA表達均低于100ug/mlCaP組，與對照組比較，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。3、100ug/mlCaP+1000ng/mlFetuinA、100ug/mlCaP+2500

6、ng/mlFetuinA、100ug/mlCaP+5000ng/mlFetuinA、100ug/mlCaP+2000ng/mlMGP、100ug/ml CaP+4000ng/mlMGP、100ug/mlCaP+6000ng/mlMGP組HK-2NF-KB mRNA表達均低于100ug/mlCaP組，與對照組比較，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。4、100ug/ml CaP HK-2組細胞培養(yǎng)液上清MCP-1、TGF-β含量均高于正常對

7、照HK-2，與對照組比較，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。100ug/ml CaP+50mmol/L PDTC、100ug/mlCaP+100mmol/LPDTC、100ug/ml CaP+200mmol/L PDTC組細胞培養(yǎng)液上清MCP-1、TGF-β含量均低于100ug/ml CaP組，與對照組比較，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論:1.磷酸鈣作用于腎小管上皮細胞誘導其釋放MCP-1、TGF-β炎癥介質(zhì)，兩者可