巨噬細(xì)胞對腎小管上皮細(xì)胞-磷酸鈣晶體體系中Fetuin A表達(dá)的調(diào)控作用.pdf

1、目的:探討巨噬細(xì)胞對腎小管上皮細(xì)胞(HK-2)-磷酸鈣晶體體系中胎球蛋白A表達(dá)的調(diào)控作用及體系中胎球蛋白A-高遷移率族蛋白B1(HMGB1)間的關(guān)系。
　　方法:實驗分為兩部分，第一部分，細(xì)胞分為A、B、C、三組，A組:單獨培養(yǎng)腎小管上皮細(xì)胞;B組:腎小管上皮細(xì)胞+磷酸鈣晶體(100ug/ml);C組:腎小管上皮細(xì)胞+磷酸鈣晶體(100ug/ml)+巨噬細(xì)胞;C組利用Transwell共培養(yǎng)系統(tǒng)建立巨噬細(xì)胞-磷酸鈣晶體-腎小管上皮

2、細(xì)胞體外共培養(yǎng)體系。各組分別于6h、9h、12h后，在相差顯微鏡下對各組腎小管上皮細(xì)胞的形態(tài)變化進(jìn)行觀察;隨后收集腎小管上皮細(xì)胞，將所收集的腎小管上皮細(xì)胞用于提取總RNA，分別檢測各組細(xì)胞中的胎球蛋白A的表達(dá)水平;將各組細(xì)胞培養(yǎng)液離心后收集上清，檢測各組細(xì)胞培養(yǎng)液上清液中的MCP-1水平。第二部分實驗中，細(xì)胞分為D、E、F、三組，D組:單獨培養(yǎng)腎小管上皮細(xì)胞(HK-2);E組:腎小管上皮細(xì)胞+磷酸鈣晶體(HK-2+CaP);F組:腎小管

3、上皮細(xì)胞+磷酸鈣晶體(100ug/ml)+HMGB1（HK-2+CaP+HMGB1），F(xiàn)組中，將不同濃度的HMGB1（0ng/ml、500ng/ml、1000ng/ml、2000ng/ml）對腎小管上皮細(xì)胞進(jìn)行干預(yù)刺激，24h后通過RT-PCR技術(shù)檢測腎小管上皮細(xì)胞中胎球蛋白A的表達(dá)水平。
　　結(jié)果:各組中，經(jīng)過磷酸鈣刺激后的腎小管上皮細(xì)胞較正常對照組的腎小管上皮細(xì)胞在形態(tài)學(xué)上未見明顯差別。胎球蛋白A在A、B、C三組中的表達(dá)水平差

4、異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，其中B、C組中腎小管上皮細(xì)胞的胎球蛋白A表達(dá)量較A組中的低，C組的表達(dá)量較B組低;另外，腎小管上皮細(xì)胞-磷酸鈣晶體-巨噬細(xì)胞組中的MCP-1濃度明顯高于其他組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。HMGB1刺激腎小管上皮細(xì)胞后，細(xì)胞中的胎球蛋白A表達(dá)上調(diào)，且隨著所添加的HMGB1濃度的增加而呈現(xiàn)出增高的趨勢，加入1000ng/ml及2000ng/ml組的胎球蛋白A表達(dá)量明顯高于對照組及500ng/ml組，

5、差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，2000ng/ml組的表達(dá)量明顯高于其他組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論:1.在共培養(yǎng)體系所模擬的體內(nèi)腎小管腔內(nèi)環(huán)境中，磷酸鈣晶體與腎小管上皮細(xì)胞的相互作用能夠誘使腎小管上皮細(xì)胞出現(xiàn)炎癥反應(yīng)并釋放炎癥因子，使細(xì)胞內(nèi)的Fetuin-A表達(dá)下調(diào)，這可能與其中的炎癥因子的調(diào)控相關(guān);2.在共培養(yǎng)體系所模擬的體內(nèi)腎小管腔內(nèi)環(huán)境中，巨噬細(xì)胞對腎小管上皮細(xì)胞-磷酸鈣晶體體系中的細(xì)胞炎癥因子有顯著