TNF-α-ERK途徑在PNS預(yù)處理緩解SD大鼠炎性內(nèi)臟痛中的作用.pdf

1、[目的]檢測 PNS預(yù)處理 SD大鼠炎性內(nèi)臟痛中 TNF-a與ERK1/2蛋白的表達變化，初步探討PNS預(yù)處理緩解炎性內(nèi)臟痛的機制。
　　[方法]用行為學(xué)方法及VPI評分檢測乙酸致炎性內(nèi)臟痛SD大鼠模型；組織學(xué)方法通過HE染色，免疫組化、WB及ELISA等方法檢測脊髓背角 TNF-a、IL-1β的表達以及 ERK1/2的磷酸化改變；通過PNS預(yù)處理干預(yù)后，比較炎性內(nèi)臟痛的變化脊髓背角 TNF-a、IL-1β的表達以及ERK1/2的

2、磷酸化改變等。
　　[結(jié)果]1. VPI評分結(jié)果：腹腔注射乙酸后，NS預(yù)處理組大鼠在第1個15min VPI均數(shù)為79分，在第15-30min達到反應(yīng)高峰，30min時VPI評分為124分，持續(xù)到第70min左右；PNS預(yù)處理組大鼠在第1個15min VPI均數(shù)為40分，在第20-35min達到反應(yīng)高峰，VPI評分為118分，持續(xù)到第60min左右。兩實驗組相較，NS預(yù)處理組大鼠VPI評分較高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。從

3、第120min開始，兩實驗組大鼠的VPI評分無明顯差異。2. HE染色結(jié)果：正常大鼠小腸平滑肌厚度50μm左右，注射乙酸后，大鼠小腸明顯抽搐，平滑肌厚度變化明顯，60min時最薄，為15±3.70μm。計數(shù)中性粒細胞，發(fā)現(xiàn)注射乙酸后其數(shù)目迅速增高，60min達峰值。PNS預(yù)處理組各亞組粒細胞計數(shù)與NS預(yù)處理組相比，無明顯差異；3．TNF-α、IL-1β的表達變化：注射1％乙酸后，TNF-a的表達迅速增加，30min時即達到1200pg/

4、ml，90min時達到峰值（1450±35pg/ml）。180min時仍有1000pg/ml以上。正常大鼠脊髓中幾乎沒有檢測到IL-1β的表達，注射1%乙酸后，IL-1β的表達迅速增加，60min時達到峰值（15±1.32pg/ml）。180min時仍有1000pg/ml以上。與NS預(yù)處理組相比較，注射1%乙酸后，TNF-a的表達增幅減小，30min時為500pg/ml，90min時達到峰值（750±23pg/ml）。TNF-a的濃度各

5、時間點均小于NS預(yù)處理組。PNS預(yù)處理后用ELISA法檢測炎性內(nèi)臟痛大鼠脊髓IL-1β的濃度變化。與NS與處理組相比較，注射1%乙酸后，IL-1β的表達增幅減小不明顯，這與TNF-a表達不同。4．胸段脊髓背角 p-ERK1/2的表達：在脊髓前角和中央側(cè)角，p-ERK1/2可見表達在胞體，在背角，清晰的神經(jīng)元胞體不可見。腹腔注射乙酸后，NS預(yù)處理各亞組脊髓背角p-ERK1/2表達均高于正常組，30、60min組p-ERK1/2表達逐漸增高

6、，90，180min亞組p-ERK1/2表達有所下調(diào)，60min組p-ERK1/2表達最高; PNS預(yù)處理組30min亞組 p-ERK1/2的表達略強于正常，但差異不顯著，60、90、120min各亞組p-ERK1/2表達逐漸增加，120min時最高，180min時下調(diào)。且60、90min亞組p-ERK1/2表達明顯低于相應(yīng)時間點NS預(yù)處理組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　[結(jié)論]PNS預(yù)處理緩解SD大鼠炎性內(nèi)臟痛的機制可能與其調(diào)節(jié)TN