TNF-α與CD44在SD大鼠分泌性中耳炎的表達及意義.pdf

1、目的:分泌性中耳炎(Otitis media with effusion,OME)是以鼓室積液為特征的慢性非化膿性炎癥,其發(fā)病機制目前尚不明確,通常認為與咽鼓管機械性阻塞、感染、免疫反應有關。本實驗通過建立OME大鼠模型,研究TNF-α與CD44在SD大鼠聽泡粘膜上皮中的表達變化,探討TNF-α與CD44在OME發(fā)生、發(fā)展中所起的作用。
　　 方法:成年健康SD大鼠40只,設立正常對照組、手術對照(PBS)組、OME模型組三個實

2、驗組。正常對照組選SD大鼠4只,不作任何處理,直接取聽泡表面粘膜及聽泡灌洗液檢測；手術對照(PBS)組選用SD大鼠16只分別在中耳腔內(nèi)注射磷酸緩沖液(PBS),按2天、4天、7天、15天四個不同時間點處死SD大鼠后取聽泡灌洗液和聽泡粘膜組織檢測；OME模型組在中耳腔注射脂多糖(LPS)后,與手術對照(PBS)組相對應,按四個不同時間點取聽泡粘膜組織及大鼠聽泡灌洗液行檢測(各時間段均多選入一只SD大鼠,以防出現(xiàn)造模過程中動物死亡所致實驗動

3、物數(shù)量不夠之情況)。聽泡灌洗液運用ELISA法檢測各組中腫瘤壞死因子(TNF-α)濃度。聽泡粘膜組織通過固定、包埋制成切片,運用HE染色法查看各組大鼠聽聽泡粘膜組織細胞的形態(tài)學改變,采用免疫組化SP法檢測聽泡粘膜中粘附分子CD44及TNF-α在不同實驗組中的陽性表達,用Image—Pro Plus6.0多媒體彩色病理圖像分析系統(tǒng)進行分析,統(tǒng)計學分析得出實驗結論。
　　 結果:1、采用ELISA法對正常對照組聽泡灌洗液中的TNF-

4、α濃度進行檢測,其平均濃度為:91.831ng／ml。手術對照(PBS)組聽泡灌洗液中平均TNF-α濃度在術后2天、4天、7天、15天時為148.858ng／ml、169.898ng／ml、135.753ng／ml、101.830ng／ml。OME實驗組,聽泡滲液中的TNF—α平均濃度分別為201.020ng／ml、235.774ng／ml、230.681ng／ml、116.958ng／ml。OME實驗組灌洗液的TNF—α濃度在受LPS

5、影響后的七天左右最高,其后逐漸減輕,在15天時,炎癥因子降至最低點。以a=0.05為檢驗標準,做組間配對t檢驗,OME實驗組與正常對照組和手術對照(PBS)組比較有明顯差異(P<0.05)。提示在OME大鼠模型,TNF—α的濃度在OME實驗組顯著高于對照組。2、HE染色切片可見,正常對照組聽泡粘膜無炎癥改變；手術對照(PBS)組術后2天、4天、7天、15天均未見聽泡粘膜上皮細胞有明顯改變,僅粘膜下有少量炎癥細胞浸潤；OME實驗組術后兩天

6、可見聽泡粘膜水腫,炎性細胞浸潤,其中有大量中性粒細胞。術后四天組見毛細血管擴張,炎性細胞浸潤增強,以大量中性粒細胞為主。術后七天組可見上皮下間隙增寬,更多的炎性細胞浸潤,仍以大量中性粒細胞為主。術后15天組出現(xiàn)成纖維細胞增生,新生血管增多,并可見到單核巨噬細胞浸潤,中耳粘膜明顯增厚的改變。3、免疫組化SP染色,正常對照組TNF-α和CD44均在粘膜上皮及上皮下結締組織僅少量表達。手術對照(PBS)組TNF-α和CD44染色陽性的細胞表達

7、部位與正常對照組無變化,且四個時間點之間表達強度和陽性細胞數(shù)無明顯差異(P>0.05),無統(tǒng)計學意義。OME實驗組聽泡粘膜上皮細胞和粘膜下結締組織中均有TNF—α和CD44陽性表達,尤其在杯狀細胞及粘膜下混合腺強烈表達,其術后15天強烈表達。經(jīng)Image—Pro Plus6.0檢測雙側聽泡粘膜陽性細胞灰度值,使用SPSS13.0采用組間t檢驗、相關性分析。OME實驗組與手術對照(PBS)組和正常對照組TNF—α和CD44陽性表達經(jīng)統(tǒng)計學

8、分析發(fā)現(xiàn):OME實驗組與對照組間兩種因子的表達強度有明顯差異(P<0.05)。通過相關性分析,發(fā)現(xiàn)OME實驗組內(nèi),TNF-α和CD44表達明顯相關。手術組不同時間段TNF—α和CD44陽性表達無明顯差異(P>0.05),無統(tǒng)計學意義。
　　 結論:1、在OME大鼠模型急性期,鼓室積液的中TNF-α濃度與炎癥的嚴重程度密切相關。2、TNF-α介導炎癥反應的方式可能是激活中性粒細胞。在這一過程中,粘附分子CD44參與了中性粒細胞的粘