針刺“寧心安神”抗焦慮的下丘腦NPR-A機(jī)制研究.pdf

1、目的：本課題在針刺“寧心安神”對(duì)實(shí)驗(yàn)性慢性情緒應(yīng)激（Chronic Emotional Stress,CES）焦慮模型有抗焦慮效應(yīng)，以及對(duì)中樞利鈉肽分子功能水平有影響的基礎(chǔ)上，以調(diào)節(jié)利鈉肽-HPA軸(hypothalamic-pituitary-adrenocortical axis,HPA)為挈入點(diǎn)，應(yīng)用利鈉肽A型受體（natriuretic peptide receptor，NPR-A）拮抗劑阻斷中樞下丘腦室旁核（paraventr

2、icular nucleus of hypothalamus,PVN）的NPR-A，觀察針刺對(duì)焦慮障礙大鼠行為學(xué)和HPA軸的影響，從而探討針刺“寧心安神”抗焦慮效應(yīng)的下丘腦NPR-A受體調(diào)節(jié)機(jī)制，為針刺臨床運(yùn)用“寧心安神”治則提供科學(xué)依據(jù)，為科學(xué)詮釋針刺“寧心安神”的生物學(xué)機(jī)制奠定基礎(chǔ)。
　　方法：選用清潔級(jí)Sprague-Dawley雄性大鼠，按體質(zhì)量編號(hào)隨機(jī)分為空白組、模型組、針刺組、下丘腦PVN注射生理鹽水組（假注射

3、組）、下丘腦PVN注射NPR-A拮抗劑組（模藥組）、下丘腦PVN注射NPR-A拮抗劑針刺組（針?biāo)幗M），共六組。參照文獻(xiàn)改良后建立不可預(yù)知慢性情緒應(yīng)激(CES)焦慮模型。運(yùn)用神經(jīng)化學(xué)阻斷技術(shù)，采用腦立體定位儀,根據(jù)PaXinos和Watson大鼠腦定位圖譜進(jìn)行PVN定位埋管、微量注射拮抗劑。采取手針針刺，取單側(cè)“神門”、“內(nèi)關(guān)”，隔日一次，左右交替，每5min捻針1次，每穴每次捻0.5min，平補(bǔ)平瀉，治療20min。通過高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)

4、（elevated plus maze test，EPM）對(duì)各組大鼠進(jìn)行行為學(xué)測(cè)試，運(yùn)用免疫組化法(immunohistochemistry,IHC)檢測(cè)下丘腦室旁核心房利鈉肽（atrial natriuretic peptide,ANP）及其受體NPR-A，以及下丘腦室旁核促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素（corticotropin-releasing hormone，CRH）表達(dá)，利用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法（Enzyme-linked immu

5、nosorbent assay，Elisa）來檢測(cè)血漿促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素CRH、促腎上腺皮質(zhì)激素（adreno-cortico--tropic-hormone,ACTH）、皮質(zhì)酮(corticosterone，CORT）的含量。
　　結(jié)果：
　　1、行為學(xué)測(cè)試結(jié)果：（1）OT％值：模型組、模藥組、針?biāo)幗M均較空白組顯著降低（均P＜0.05）；針刺組OT%值明顯高于模型組（P＜0.01），趨近于空白組；假注射組、模藥組、針

6、藥組OT%值明顯低于針刺組（P＜0.05，P＜0.01），接近于模型組。（2）OE%值：組間比較未現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但與空白組比較，模型組OE%值呈更低趨勢(shì)；針刺能升高焦慮大鼠OE%值，更接近于空白組；針?biāo)幗M、模藥組OE%值均低于空白組和針刺組，接近于模型組。
　　2、下丘腦ANP-NPRA指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果：（1）ANP：與空白組相比，模型組、假注射組下丘腦ANP平均光密度明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（均P＜0.01）；與模型組比較，針刺組

7、下丘腦ANP平均光密度值升高，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），模藥組和針?biāo)幗M明顯升高（均P＜0.01）；與針刺組比較，假注射組ANP平均光密度明顯降低（P＜0.01），而模藥組與針?biāo)幗M則有升高的趨勢(shì)，但不具統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）；模藥組與針?biāo)幗M下丘腦ANP平均光密度較假注射組明顯升高（均P＜0.01）。（2）NPR-A：模型組、假注射組較空白組下丘腦NPR-A表達(dá)明顯降低（均P＜0.01），針刺組較模型組則顯著升高（P＜0.01）；

8、模藥組、針?biāo)幗M下丘腦NPRA表達(dá)較各組均顯著降低（P＜0.01）。
　　3、HPA軸相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果：（1）下丘腦CRH：模型組、假注射組、模藥組、針?biāo)幗M下丘腦CRH水平均較空白組均明顯增高（P＜0.01，P＜0.05），針刺組相比模型組降低明顯（P＜0.05）；與針刺組比較，假注射組、模藥組下丘腦CRH水平顯著升高（P＜0.05，P＜0.01），模藥組較假注射組CRH有升高趨勢(shì)，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），針?biāo)幗M較模藥組下丘

9、腦CRH表達(dá)呈現(xiàn)更低水平（P＜0.05）。（2）血漿CRH：模型組、模藥組、針?biāo)幗M血漿中CRH水平較空白組明顯升高（P＜0.01，P＜0.05），針刺組與模型組比CRH水平更低，接近正常大鼠，差異具有顯著性（P＜0.05）；模藥組、針?biāo)幗MCRH水平較針刺組升高，但不具顯著性差異（P＞0.05），與模型組非常接近。（3）血漿ACTH：模型組較空白組明顯的升高（P＜0.01），針刺組與模型組比ACTH值明顯降低（P＜0.01）；針?biāo)幗M與空白

10、組、針刺組比較ACTH值明顯升高（P＜0.01），與模型組、模藥組ACTH值接近，差異不具顯著性（P＞0.05）。（4）血漿CORT：模型組較空白組明顯升高（P＜0.01），針刺組與模型組比血漿CORT值明顯降低（P＜0.01）；針?biāo)幗M、模藥組與空白組、針刺組CORT值相比明顯升高（P＜0.01，P＜0.05），與模型組、假注射組接近（P＞0.05）。
　　結(jié)論：
　　1、針刺“寧心安神”具有抗焦慮效應(yīng)，其作用可能通過調(diào)節(jié)下