骨質疏松狀態(tài)下BMSCs成骨能力及與NF-κB信號通路相關基因的研究.pdf

1、目的:
　　研究骨質疏松狀態(tài)下成骨分化的能力及其調(diào)控基因。
　　材料與方法:
　　(1)骨質疏松大鼠模型的建立及鑒定:取20只同批次，體重接近，健康狀態(tài)良好的3月齡雌性SD大鼠，隨機分為兩組，一組行去勢手術（OP組），另一組行假手術（NT組），手術3個月后，通過子宮體重比、血清學和Micro-CT影像學檢測對動物模型進行鑒定。
　　(2)骨髓間充質干細胞(Bone marrow mesenchymal stem

2、cells，BMSCs)的分離培養(yǎng)及鑒定:采用全細胞貼壁法分離、培養(yǎng)和純化BMSCs，觀察其細胞形態(tài)，并用流式細胞術對其進行鑒定。
　　(3) BMSCs成骨能力差異:成骨誘導后，測定兩組細胞堿性磷酸酶(AlkalinePhosPhatase，ALP)、骨鈣素(Osteocalcin，OC)在7d和14d時的表達差異，茜素紅染色檢測21天鈣結節(jié)形成差異。
　　(4)差異基因的篩選和鑒定:兩組BMSCs成骨誘導4天后，提取RN

3、A，通過基因芯片技術篩選出與核轉錄因子(nuclear factor-κB，NF-κB)信號通路相關的表達差異基因，并用qRT-PCR進行鑒定。
　　結果:
　　(1) OP組與NT組相比，血清雌二醇表達量下降20.09％(p＜0.05)，體重變化量上升67.65％(p＜0.05)，子宮體重比測量顯示:與NT組相比，OP組下降77.51％(p＜0.05)，Micro-CT檢測顯示:與NT組相比，OP組的骨小梁間隔減少，骨質量

4、降低;骨密度（Bone mineral density, BMD）、骨體積分數(shù)（Bone volume/Total volume，BV/TV）、骨小梁數(shù)目(Trabeculaenumber, Tb.N)分別減少45.64％、57.08％、60.88％(P＜0.05);骨小梁分離度(The Trabecular spacing，Tb.Sp)增加252.01％(P＜0.05);
　　(2)流式細胞術鑒定結果顯示，表面標記物CD29和C

5、D90.1呈陽性表達，表達率分別為100％和99.2％，CD45和CD11b/c呈陰性表達，表達率分別為2.9％和0.2％;
　　(3)相比于NT組，OP組BMSCs的ALP的7d和14d表達量分別降低46.73％、27.97％(P＜0.05);OC的7d和14d表達量分別降低34.63％、47.45％(P＜0.05);鈣結節(jié)形成數(shù)量，OP組均明顯小于NT組(P＜0.05);
　　(4)篩選出1435個表達量差異2倍以上的基

6、因，其中有7個與NF-KB信號通路相關的重要差異基因，RT-PCR驗證結果顯示TRAF3、CXCL12、CXCR4、TNF-α、Bcl2a1、BCL-XL的表達量，NT組較OP組，分別高出80.00％、61.71％、72.81％、85.92％、87.19％、38.07％(P＜0.05)，而IL-1β的表達量，NT組較OP組降低69.62％(P＜0.05).
　　結論:
　　(1)大鼠去勢后，骨結構發(fā)生明顯改變，骨小梁明顯減少