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1、目的:研究淸脈飲及其拆方的含藥血清對(duì)腫瘤壞死因子α(TNF-α)誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(EAhy926)損傷的血管內(nèi)皮細(xì)胞及相關(guān)因子的影響。
方法:制備實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的含藥血清;將培養(yǎng)的EAhy926細(xì)胞,隨機(jī)分為空白對(duì)照組、TNF-a損傷組、10%低劑清法組、10%中劑清法組、10%高劑清法組、活血組、全方組、軟堅(jiān)組等。各中藥含藥血清及清法不同濃度含藥血清與TNF-α共同處理血管內(nèi)皮細(xì)胞24h后,光鏡下觀察EAhy926細(xì)胞的形態(tài)
2、變化,電鏡下觀察EAhy926細(xì)胞的細(xì)胞器改變;免疫組化法檢測(cè)CRP、IL-6、ET-1及VEGF光學(xué)顯微鏡下觀察它們?cè)诩?xì)胞中它們的表達(dá)情況;硝酸還原法檢測(cè)NO,通過(guò)顯色深淺測(cè)定其濃度的高低;Real-time PCR檢測(cè)NF-ΚB基因的表達(dá);
結(jié)果:①光鏡下細(xì)胞大體形態(tài)變化清脈飲含藥血清與TNF-α共同處理的細(xì)胞,各組損傷均較少,細(xì)胞數(shù)量多,活血組細(xì)胞數(shù)量相對(duì)較少;②電鏡下細(xì)胞結(jié)構(gòu)的改變:清脈飲含藥血清與 TNF-α共同處理
3、的細(xì)胞其損害較單純 TNF-α損傷組的細(xì)胞小,其中以中劑清法組、軟堅(jiān)組、西藥組,對(duì)細(xì)胞器的損傷最少,細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)與正常對(duì)照組比較沒(méi)有明顯差異;③下調(diào)NO濃度,CRP、IL-6、ET-1及VEGF的表達(dá)量上,組間比較,10%中清組較其他濃度在下調(diào)內(nèi)皮素具有良好效果最好;下調(diào)NO濃度以及CRP、IL-6、VEGF的表達(dá),西藥組的效果最佳,10%中清組效果優(yōu)于軟堅(jiān)組、活血組。清法各濃度組之間比較,10%中清組較其他濃度效果最好;④下調(diào)NF-
4、ΚB基因的表達(dá)上,組間比較,10%中清組、全方組、西藥組在控制NF-ΚB的表達(dá)上具有優(yōu)勢(shì),西藥組的效果最佳,10%中清組、全方組、10%低清組、10%高清組、軟堅(jiān)組、活血組依次次之。10%中清組與全方組相當(dāng)且低于活血組(P<0.05),說(shuō)明10%中清組效果優(yōu)于活血組。清法各濃度組之間比較,10%中清組較其他濃度在下調(diào)NF-ΚB基因的表達(dá)具有效果最好。
結(jié)論:①清脈飲及其拆方含藥血清可能通過(guò)拮抗TNF-α對(duì)體外培養(yǎng)的動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞
5、的損傷作用,保持其結(jié)構(gòu)完整性;以起到防止或減輕動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞損傷的作用;西藥組、清法方含藥血清效果最佳。②清脈飲及其拆方含藥血清可能通過(guò)下調(diào)受損內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)NO濃度,CRP、ET-1、IL-6、VEGF的表達(dá)量以阻止內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)一步損傷,其中以10%清法組效果較佳,優(yōu)于活血組;③清脈飲及其拆方含藥血清可能通過(guò)阻斷TNF-α激活的NF-κB經(jīng)典通路,調(diào)控NF-κB基因表達(dá)從而減輕對(duì)血管內(nèi)皮的炎癥反應(yīng)。④從實(shí)驗(yàn)的各個(gè)角度中觀察,在清脈飲及其拆方中
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