附子多糖聯(lián)用烏頭堿對肝細(xì)胞肝癌的作用及機(jī)理初步研究.pdf

1、近年來，世界各國的惡性腫瘤發(fā)病情況呈上升趨勢，其中肝癌的死亡率在惡性腫瘤中排名第三。扶正祛邪是抗腫瘤的根本大法，附子具有回陽救逆、補(bǔ)火助陽、散寒止痛之功。近年來的研究顯示附子提取液具有抗癌、強(qiáng)心、抗衰老和增強(qiáng)免疫的作用，其主要有效成分為附子多糖和烏頭堿。本研究旨在探討附子多糖和烏頭堿聯(lián)合抗肝癌作用特點(diǎn)和機(jī)理，為臨床合理應(yīng)用附子“扶正祛邪”抗腫瘤提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　目的:研究附子多糖對免疫的影響及免疫抗肝癌的作用;研究烏頭堿對肝癌的

2、直接殺傷作用及對免疫的損傷作用，探討附子多糖和烏頭堿共同抗肝癌的效應(yīng)及二者組成的改變對效應(yīng)的影響，從而評級臨床附子“重用”、“重用+久煎”的合理性。
　　方法:用熒光染色法觀察附子多糖、烏頭堿及不同組成對Hepa1-6肝癌細(xì)胞凋亡的影響，用MTT法觀察附子多糖、烏頭堿及不同組成對Hepa1-6肝癌細(xì)胞、脾細(xì)胞增殖的影響及脾細(xì)胞殺傷Hepa1-6肝癌細(xì)胞的作用;觀察附子多糖、烏頭堿及不同組成對荷瘤C57小鼠的抑瘤率及免疫的影響。

3、r>　　結(jié)果:1.附子多糖對Hepa1-6肝癌細(xì)胞的增殖和凋亡無明顯影響（P＞0.05），能促進(jìn)體外培養(yǎng)小鼠脾細(xì)胞的增殖(P＜0.01)，且具有劑量依賴性，可增強(qiáng)脾淋巴細(xì)胞殺傷肝癌細(xì)胞的能力;對Hepa1-6荷瘤小鼠的腫瘤（瘤重）有微弱的抑制作用（抑制率為18.22％），可增加肝癌荷瘤C57小鼠脾臟的重量及脾臟指數(shù)(P＜0.05);顯著增加脾臟中CD4+和CD8+T細(xì)胞的數(shù)量(P＜0.05)。
　　2.烏頭堿對Hepa1-6細(xì)胞增

4、殖有顯著抑制作用（P＜0.05），呈現(xiàn)劑量和時(shí)間依賴，能抑制體外培養(yǎng)小鼠脾細(xì)胞的增殖(P＜0.01)，具有一定的劑量依賴性，能促進(jìn)Hepa1-6肝癌細(xì)胞凋亡，且具有劑量依賴性;對Hepa1-6荷瘤小鼠的腫瘤（瘤重）呈現(xiàn)一定的抑制作用，且劑量依賴，對荷瘤小鼠的脾臟重量和脾臟指數(shù)，胸腺重量和胸腺指數(shù)雖然有一定的抑制趨勢，但均無顯著影響(P＞0.05)。
　　3.烏頭堿無效濃度（50μg·mL1），1∶10比例配比附子多糖聯(lián)合使用，對H

5、epa1-6肝癌細(xì)胞增殖無抑制作用，烏頭堿有效濃度（200和400μg·mL1）時(shí)，1∶10配比附子多糖聯(lián)合使用，對烏頭堿抑制Hepa1-6肝癌細(xì)胞增殖作用無影響;烏頭堿有效濃度（200μg·mL-1），按1∶10配比附子多糖聯(lián)合使用，對烏頭堿抑制Hepa1-6肝癌細(xì)胞增殖的作用無影響，當(dāng)比例為1∶20時(shí)，對烏頭堿抑制Hepa1-6肝癌細(xì)胞增殖的作用有所增加;烏頭堿有效濃度（200μg·mL1），按1∶5、1∶10、1∶20配比附子多糖

6、聯(lián)合使用，隨著附子多糖比例的增加，烏頭堿對脾細(xì)胞增殖的抑制作用逐漸減弱;并能促進(jìn)離體脾細(xì)胞殺傷肝癌細(xì)胞;烏頭堿有效濃度（150μg·kg-1），1∶10、1∶20配比附子多糖聯(lián)合使用，對Hepa1-6荷瘤C57小鼠的抑瘤作用增加(P＜0.05);烏頭堿有效濃度（150μg·kg-1），1∶40配比附子多糖聯(lián)合使用，對Hepa1-6荷瘤C57小鼠的抑瘤作用無進(jìn)一步增加;烏頭堿有效濃度(150μ g·kg1)與附子多糖聯(lián)合使用三個(gè)比例組(1

7、∶10、1∶20、1∶40)，對其脾臟重量和脾臟指數(shù)、胸腺重量和胸腺指數(shù)均有促進(jìn)作用;可增加脾臟中巨噬細(xì)胞數(shù)量，增加CD4+和CD8+T細(xì)胞數(shù)量。
　　結(jié)論:附子多糖具有增強(qiáng)免疫功能，在增加免疫有效劑量范圍內(nèi)顯示出一定的免疫抗腫瘤效應(yīng)，但對肝癌無直接抑制作用;烏頭堿有直接抗腫瘤效應(yīng)，且對荷瘤小鼠有免疫損傷作用;附子多糖和烏頭堿聯(lián)合使用，可增強(qiáng)抗腫瘤效應(yīng)，改善烏頭堿對Hepa1-6荷瘤小鼠造成的免疫損傷，烏頭堿與附子多糖組成的改變對