韭菜精細(xì)胞、卵細(xì)胞及原胚細(xì)胞的分離.pdf

1、被子植物的精卵細(xì)胞都位于體內(nèi)，其中精細(xì)胞包裹在花粉粒中，卵細(xì)胞又深埋在胚珠中，且整個(gè)受精過程到早期的胚胎發(fā)生也都在體內(nèi)完成，其中包括精卵細(xì)胞的識別、合子的不對稱分裂及胚胎發(fā)生模式等。精細(xì)胞和卵細(xì)胞的成功分離，為受精機(jī)理的研究提供了基本前提。本研究成功分離得到了具有生活力的精、卵細(xì)胞、合子及早期原胚細(xì)胞，為進(jìn)一步的研究韭菜雌雄配子體的分子生物學(xué)特性及受精機(jī)理等提供了條件。主要內(nèi)容如下： ⑴韭菜生殖細(xì)胞、精細(xì)胞的分離：韭菜的花粉屬于

2、二胞型，即成熟的花粉粒中只含有一個(gè)生殖細(xì)胞，只有在花粉管中才會發(fā)生有絲分裂形成兩個(gè)精細(xì)胞。本實(shí)驗(yàn)首先采用直接爆破花粉粒的方法分離得到具生活力的生殖細(xì)胞，并收集得到了生殖細(xì)胞的群體；嘗試完全離體萌發(fā)花粉管及活體-離體法，成功分離得到了具生活力的精細(xì)胞，并收集得到了群體。為迸一步的研究韭菜的精細(xì)胞發(fā)生及其他分子生物學(xué)特性提供了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 ⑵韭菜卵細(xì)胞、合子及早期原胚細(xì)胞的分離：根據(jù)韭菜的開花及受精規(guī)律，成功的分離得到了卵細(xì)胞，并且還

3、觀察了從開花當(dāng)天到開花第三天整個(gè)卵器細(xì)胞的發(fā)育規(guī)律，發(fā)現(xiàn)整個(gè)過程中，兩個(gè)助細(xì)胞的體積都逐漸變大，但細(xì)胞的極性并沒有發(fā)生明顯的變化；卵細(xì)胞也逐漸變大，細(xì)胞核較大位于細(xì)胞的一邊，另一邊有一個(gè)大的液泡，且細(xì)胞中存在著明顯的細(xì)胞質(zhì)索，經(jīng)FDA染色后熒光也多集中在細(xì)胞核部位；受精后，卵細(xì)胞變化成為合子，體積明顯變小，細(xì)胞質(zhì)明顯變濃厚，細(xì)胞核不再明顯，大液泡消失，經(jīng)FDA染色后，熒光彌散于整個(gè)細(xì)胞表面；最后還成功收集得到了卵細(xì)胞及合子的細(xì)胞群體，為