白靈菇堿提多糖的純化及其抗癌活性的研究.pdf

1、大多數(shù)真菌多糖具有抗腫瘤、參與免疫調(diào)節(jié)等作用，真菌多糖的研發(fā)也成為真菌研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)之一。本文以白靈菇為對(duì)象，在前人研究的基礎(chǔ)上，探討了白靈菇多糖的提取、分離純化，進(jìn)行了白靈菇多糖理化性質(zhì)的研究，并對(duì)其基本結(jié)構(gòu)進(jìn)行了探討，著重研究了白靈菇多糖對(duì)HepG-2肝癌細(xì)胞生存、生長(zhǎng)的影響，初步探討了其產(chǎn)生作用的機(jī)制。
　　采用堿提法對(duì)白靈菇多糖進(jìn)行提取，使粗多糖得率為5.14％;用瓊脂糖凝膠柱層析進(jìn)行分離純化，得到4個(gè)組分:PNA-1、P

2、NA-2、PNA-3及PNA-4，測(cè)定出總多糖含量為84.17％，其中含有蛋白質(zhì)3.70％。
　　對(duì)其溶解性、粘度、熱特性、結(jié)晶性等理化性質(zhì)進(jìn)行了研究，采用高效液相法測(cè)得PNA-2分子量為37 kDa; PNA-2的紅外光譜分析出其為β-型多糖，含有吡喃鍵及呋喃鍵;采用氣相色譜法對(duì)PNA-2的單糖組分進(jìn)行分析，得出其單糖含有大量葡萄糖，有少量甘露糖、半乳糖，還有痕量核糖。
　　以HepG-2肝癌細(xì)胞為研究對(duì)象，通過(guò)MTT法研

3、究了白靈菇多糖對(duì)其增殖的抑制作用，確定試驗(yàn)組濃度為PNA-2的12.5μg/mL、62.5μg/mL、125μg/mL;進(jìn)行細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)，得出PNA-2能夠抑制HepG-2細(xì)胞的遷移;進(jìn)行了掃描電鏡觀察細(xì)胞形態(tài)實(shí)驗(yàn)及AO/EB染色實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示，PNA-2能夠誘導(dǎo)HepG-2細(xì)胞凋亡;彗星實(shí)驗(yàn)（單細(xì)胞凝膠電泳實(shí)驗(yàn)）表明:48 h后，PNA-2能對(duì)HepG-2細(xì)胞DNA造成顯著損傷;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期結(jié)果顯示，PNA-2將HepG-2

4、細(xì)胞阻滯在G0/G1期，并引起細(xì)胞凋亡。
　　對(duì)PNA-2誘導(dǎo)HepG-2細(xì)胞凋亡的作用機(jī)制進(jìn)行了初步探討。羅丹明染色法檢測(cè)其線(xiàn)粒體膜電位的變化，結(jié)果顯示，PNA-2能明顯破壞HepG-2細(xì)胞的線(xiàn)粒體膜電位;對(duì)HepG-2細(xì)胞促凋亡因子caspase-3、caspase-9、Cytochrome C及抑凋亡因子Bcl-2的表達(dá)結(jié)果表明，caspase-3、caspase-9、Cytochrome C的表達(dá)顯著上升，而B(niǎo)cl-2表達(dá)