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1、華中農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文產(chǎn)纖維素酶解淀粉芽孢桿菌Tx26的篩選及基因在大腸桿菌中的表達(dá)姓名:謝凝子申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別:碩士專業(yè):生化與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師:劉子鐸20081201華中農(nóng)業(yè)大學(xué)2008屆碩士學(xué)位論文ScreeningcellulaseproducingBacillusamyotiquefaciensTx26。●n■■●一‘‘‘‘一‘a(chǎn)ndexPresslonolitsend02IUCanaSe2eneinEscherichiaco
2、ilAbstractOnestrainofcellulaseproducingBacilluswhichcandegradesodiumcarboxymethylcellulos(CMCNa)wasisolatedontheselectedmediumusingCMCNaasonlycarbonsourcefromrottenricestrawandleavesItwasidentifiedasBacillusamyoliquefaci
3、ensby16SrDNAsequenceshomologyanalysis1f1艙productionofenzymebymicroorganismneedssomekindofinducingfactorsVariouscultureconditionsforT)(26strainwerestudiedTheresultsshowedthattheoptimalharvestingperiodofe/lzy//lewas48htheo
4、ptimalfermentingtemperaturewas37“C,pH7wastheoptimalfermentingpHconditionandthebestcarbonsourcewasthecorncobpowderwhilethebestnitrogensourCewasyeastextractwithpeptoneinourexperirnemconditionTheendoglucanasegeneofBamylo腳ue
5、faciensTx26wasamplifiedbyPCR謝tllprimersbasedonDNAsequencesofBacilluscellulasegenesclonedpreviouslywhichdownloadedfromGenBankTheamplifiedPCRfragmentWasligatedtotheEcoliplasmidpGEX6p1TherecombinantplasmidWaStransformedinto
6、theEcoliDH5astrainAndtherecombinantplasmid(namedpGEXTx26)wastransformedintoEcoliBL21(DE3)andinducedtoexpress硼1etransformantsontheselectiveCMYplate000“#mLAmpadded)weredetectedforCMCasebytheCongedmethodThetransformantswere
7、culturedinLB(100Itg/mLAmpadded)andinducedbylmmol/LIPTGfor1216h111eCMCaseactivityoftherecombinantWas34186IU/mL,whichWasabout44timesoftheinitialstrainSDSPAGEshowedthatthemolecularmassofrecombinantproteinWasabout82kD’Ihecha
8、racterofrecombinantendoglucanaseWasstudiedinthisexperimentation啊地resultsshowedthattheoptimumreactionpHwaspH55:theoptimumreactiontemperatureWas55℃;EnzymestabilityexperimentshowedthattheresidualactivityWas70%afterovernight
9、treatmentatpH5pH9,and60%aftertreatmentat30℃50℃forlhrespectivelyTheresultoftheeffectofmetalionsonenzymeactivityshowedthatH礦,Zn2andCustronglyinhibitedtheCMCaseactivityoftheenzyme,whileothermetalionsshowednoactivationnorinh
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