松果菊苷對秀麗隱桿線蟲壽命的影響及分子機理研究.pdf

1、松果菊苷（Echinacoside，ECH）是一種植物多酚化合物，最初于北美松果菊屬狹葉松果菊分離出來。后經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，肉蓯蓉中可以提取出大量高純度的松果菊苷。目前報道松果菊苷的藥理作用有抗氧化、抗炎、神經(jīng)保護、保護肝臟、清除自由基等。但是尚沒有文獻報道松果菊苷是否具有體內(nèi)抗衰老活性。
　　目的：本研究旨在評價松果菊苷對于線蟲壽命的延長作用并探討松果菊苷延長線蟲壽命的作用機制。
　　方法：1.壽命實驗：線蟲分為松果菊苷0μM（

2、對照組）、50μM、150μM、300μM、600μM組，通過壽命實驗初步判斷藥物的抗衰老效果，并篩選出最佳體外給藥濃度。2.壓力應(yīng)激實驗：進行37℃熱應(yīng)激實驗、百草枯氧化應(yīng)激實驗,佐證壽命實驗同時檢測松果菊苷是否通過提高線蟲壓力應(yīng)激能力延長線蟲壽命。4.產(chǎn)卵實驗：對比給藥組線蟲和空白組線蟲的產(chǎn)卵時期和產(chǎn)卵量，檢測松果菊苷在延長線蟲壽命的同時是否影響其生殖能力。4.咽泵實驗：通過對比給藥組線蟲和空白組線蟲每分鐘的咽泵次數(shù)，檢測藥物對于線

3、蟲攝取食物能力的影響。5. daf-16(mgDf50)突變株壽命實驗：線蟲分為松果菊苷0μM（對照組）、300μM組，檢測松果菊苷對daf-16基因缺失突變線蟲壽命的影響。6. DAF-16的亞細胞定位實驗：在熒光顯微鏡下觀察DAF-16::GFP轉(zhuǎn)基因蟲株經(jīng)300μM松果菊苷處理后DAF-16::GFP的亞細胞定位情況。7.熒光定量PCR實驗：對線蟲給藥一段時間后，提取線蟲總RNA，利用熒光定量PCR實驗檢測線蟲體內(nèi)DAF-16下游

4、基因sod-3,hsp-16.2和ctl-1的表達量的變化。
　　結(jié)果：1.松果菊苷在適宜的濃度范圍內(nèi)可以延長線蟲的壽命，300μM為最佳用藥劑量。2.300μM松果菊苷能提高線蟲在急性熱應(yīng)激和急性氧化應(yīng)激環(huán)境下的生存率，進一步證實了松果菊苷具有抗衰老的作用。3.松果菊苷在延長壽命的同時不會損害線蟲的生殖能力。4.松果菊苷不影響線蟲的咽泵頻率，提示我們藥物的抗衰老作用不是通過熱量限制途徑實現(xiàn)的。5.分子機制研究表明：松果菊苷促進D