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文檔簡介
1、齊墩果酸(Oleanolic acid,OA)是一種天然的五環(huán)三萜類化合物,普遍存在于食物及120余種天然植物的子葉和根莖中。目前報道齊墩果酸的藥理作用包括保肝解毒、降血糖血脂、抗炎抗病毒、抗腫瘤及抗氧化等。而近年來,齊墩果酸在抗氧化方面的活性引起了人們廣泛的關(guān)注。但是,目前尚沒有文獻報道過齊墩果酸在體內(nèi)的抗衰老活性及可能潛在的作用機制。
目的:以秀麗隱桿線蟲(Caenorkabditiselegans,C.elegans)為
2、研究對象,評價齊墩果酸的延壽作用效果并探討其延壽的分子機制。
方法:1.壽命分析實驗:將同步化的L4期線蟲分為空白對照組(0μM)和OA給藥組(100μM、200μM、300μM、600μM)進行壽命實驗,初步判斷OA的延壽效果并篩選出最佳給藥濃度。2.壓力應激實驗:通過氧應激實驗和36℃熱應激實驗,確定OA延長線蟲壽命的作用與壓力應激反應是否存在關(guān)聯(lián)。3.線蟲體內(nèi)活性氧簇(reactive oxygen species,RO
3、S)檢測:通過探討OA對線蟲體內(nèi)ROS的清除能力以進一步確定OA的延壽效果。4.咽泵實驗:比較3、6、10天的空白對照組與OA給藥組線蟲在15s內(nèi)的咽泵次數(shù)以及限食相關(guān)突變株壽命實驗,綜合判斷OA的延壽效果是否與熱限制機制有關(guān)。5.daf-16(mgDf50)突變株壽命實驗:探討OA對缺失daf-16基因的線蟲壽命是否存在影響。6. DAF-16亞細胞定位實驗:給藥后觀察DAF-16::GFP轉(zhuǎn)基因線蟲中DAF-16的亞細胞定位情況。7
4、. Quantitative real-time PCR實驗:OA給藥后提取線蟲內(nèi)總RNA,利用熒光定量PCR檢測daf-16及下游相關(guān)基因sod-3、ctl-1、hsp-16.2的表達量變化。
結(jié)果:1.通過壽命分析實驗可知OA在一定的濃度范圍內(nèi)可延長線蟲壽命,且300μM OA為最佳給藥濃度。2. OA能顯著提高線蟲在氧應激、熱應激環(huán)境下的生存率,證實OA延壽作用與壓力應激反應有關(guān)。3. OA能夠降低線蟲內(nèi)ROS的水平,進
5、一步說明OA具有延壽效果。4. OA不影響線蟲的咽泵頻率及限食突變株的壽命長短,從而確認OA的延壽作用不是通過熱量限制途徑實現(xiàn)的。5.分子機制研究表明,OA促進DAF-16進入細胞核以提高DAF-16的轉(zhuǎn)錄活性,進一步啟動與衰老相關(guān)的下游基因的表達,從而延長線蟲的壽命。
結(jié)論:綜上所述,我們以線蟲為實驗對象,評價了OA的延壽作用并對其潛在的分子機制進行了初步探索。daf-16是一個從線蟲到哺乳動物都高度保守的壽命調(diào)控轉(zhuǎn)錄因子,
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