阿霉素致大鼠慢性心力衰竭后c-kit與nanog基因表達(dá)變化.pdf

1、背景:c-kit和nanog在干細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖和分化中具有重要作用，探明c-kit與nanog陽(yáng)性細(xì)胞和疾病之間的關(guān)系近年來(lái)引起關(guān)注。心臟中的c-kit+和nanog+細(xì)胞為心肌干細(xì)胞，它們能夠分化成心肌細(xì)胞。我們以往的研究表明，在心肌梗死的邊緣區(qū)nanog的表達(dá)增加，有利于修復(fù)受損心肌。然而心臟干細(xì)胞在心衰心臟中是增加還是減少，心衰是加強(qiáng)還是減弱心肌再能力仍不明確。
　　目的:探討阿霉素致大鼠心力衰竭后心肌組織中c-kit與n

2、anog的基因表達(dá)變化，為進(jìn)一步研究充血性心衰過(guò)程中心肌再生提供形態(tài)學(xué)基礎(chǔ)。
　　方法:
　　1140只SD成年雄性大鼠，隨機(jī)分為正常對(duì)照組15只與心衰模型組125只。心衰模型的制造:阿霉素按4mg/kg腹腔注射，每周一次，共6周。正常對(duì)照組給予等量生理鹽水。在8周時(shí)，利用小動(dòng)物彩超機(jī)對(duì)正常對(duì)照組和心衰模型組大鼠進(jìn)行心功能檢測(cè)，證明心衰形成;
　　2摘取大鼠心臟，取右心壁近房室環(huán)處組織制作冰凍切片;利用免疫組化、免疫熒

3、光顯色等技術(shù)檢測(cè)心肌組織中nanog和c-kit的基因表達(dá)部位;
　　3提取右心壁近房室環(huán)處組織蛋白和mRNA;利用Western Blotting和RT-PCR等技術(shù)檢測(cè)和定量心肌組織中nanog和c-kit的基因表達(dá)量的變化。
　　結(jié)果:
　　1免疫組化顯示正常和心衰的心肌組織中均有少量nanog與c-kit陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)。正常心肌組織中nanog細(xì)胞較少，小而圓，可散在，也可成群存在，位于心肌細(xì)胞之間、血管周圍。大

4、多數(shù)血管的內(nèi)皮細(xì)胞均表達(dá)nanog，少量心肌細(xì)胞也呈陽(yáng)性表達(dá)。心力衰竭大鼠的心肌組織內(nèi)，nanog陽(yáng)性的三類細(xì)胞均減少，而且只有在心內(nèi)膜和心外膜下的心肌組織呈陽(yáng)性分布。在正常和心力衰竭大鼠心肌組織中c-kit陽(yáng)性細(xì)胞呈小圓形或橢圓形，三五成群存在，但未見到心肌細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞c-kit陽(yáng)性表達(dá)。與正常心肌相比，心力衰竭心肌內(nèi)c-kit陽(yáng)性細(xì)胞明顯減少。
　　2免疫熒光顯示在正常對(duì)照組中nanog蛋白表達(dá)于更多的心肌中，主要在部分心肌

5、細(xì)胞表達(dá)、血管內(nèi)皮和小圓形細(xì)胞也呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，分布不均勻。心力衰竭心肌中nanog表達(dá)陽(yáng)性的細(xì)胞主要分布于心外膜下心肌和心內(nèi)膜下心肌，表達(dá)量較正常心肌明顯減少，且心內(nèi)膜側(cè)心肌表達(dá)量較心外膜側(cè)減少。c-kit蛋白主要表達(dá)于心肌中的小型細(xì)胞，這些細(xì)胞在心肌中往往成群分布，主要聚集于心外膜下的心肌內(nèi)。與正常心肌相比，心衰后c-kit陽(yáng)性細(xì)胞明顯減少。未見到心肌細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)c-kit熒光。另外，還可以觀察到少數(shù)細(xì)胞共表達(dá)nanog和c-k

6、it現(xiàn)象。
　　3 Western blotting結(jié)果顯示:正常對(duì)照組中c-kit與nanog的表達(dá)量分別為451846.3±7029.35和301859.0±3549.73;心衰模型組中c-kit和nanog表達(dá)量分別為146428.7±8029.24和196803.3±3066.76;正常對(duì)照組c-kit蛋白和nanog蛋白表達(dá)明顯多于心衰模型組(P＜0.05)。
　　4 RT-PCR結(jié)果顯示:在正常對(duì)照組中c-kit