基于“主客交”理論的加減三甲散對(duì)肝纖維化大鼠血管新生相關(guān)信號(hào)通路影響的研究.pdf

1、目的：觀察加減三甲散對(duì)免疫性肝纖維化大鼠肝臟病理性血管新生HIF-1α/VEGFA/VEGFR-2及PDGFB/PDGFR/β信號(hào)通路的影響，探討加減三甲散改善肝纖維化的效果是否與抑制肝臟病理性血管新生相關(guān)，以期部分揭示“主客交”理論的科學(xué)內(nèi)涵。
　　方法：選用SPF級(jí)Wistar雄性大鼠60只，設(shè)置正常對(duì)照組（簡(jiǎn)稱正常組）20只、模型對(duì)照組20只、陽性對(duì)照組（簡(jiǎn)稱鱉甲片組）10只和加減三甲散組（簡(jiǎn)稱三甲散組）10只。除正常組外，

2、其余3組均采用豬血清腹腔注射復(fù)制免疫性肝纖維化模型。豬血清注射12周后，隨機(jī)處死正常組和模型對(duì)照組大鼠（此時(shí)記錄為模型對(duì)照1組，簡(jiǎn)稱模型1組）各6只，取肝臟組織，HE和MASSON染色后光鏡觀察肝臟病理形態(tài)，判斷造模是否成功，并取其肝臟組織及血清標(biāo)本。確定造模成功后，三甲散組給予加減三甲散組方藥物灌胃，鱉甲片組給予復(fù)方鱉甲軟肝片灌胃，正常組及模型對(duì)照組（此時(shí)記錄為模型對(duì)照2組，簡(jiǎn)稱模型2組）給予同體積的生理鹽水灌胃，治療60天結(jié)束，隨機(jī)

3、處死各組大鼠各6只，取肝臟組織，HE和MASSON染色光鏡觀察肝臟病理形態(tài)，電鏡觀察肝細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)，CD34標(biāo)記檢測(cè)肝臟微血管密度，Wester-Blot法檢測(cè)肝組織HIF-1α、VEGFA/VEGFR-2、PDGFB/PDGFR-β蛋白含量，RT-PCR法檢測(cè)肝臟組織HIF-1α、VEGFA/VEGFR-2、PDGFB/PDGFR-βmRNA含量。心臟采血，全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)肝功能指標(biāo)，ELISA法檢測(cè)肝纖維化指標(biāo)。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SP

4、SS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，組間比較，當(dāng)P＜0.05時(shí)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1.肝臟病理學(xué)觀察
　　造模12周時(shí)，模型1組肝組織病理切片光鏡下已見纖維條索由匯管區(qū)及中央靜脈分離出，包繞肝小葉，有形成假小葉之勢(shì)或者已經(jīng)形成假小葉。60天后，模型2組肝組織病理切片光鏡下已見中央靜脈及匯管區(qū)明顯纖維組織增生，較模型1組已有明顯纖維橋連接及假小葉形成。
　　2.肝功能及肝纖維化指標(biāo)
　　模型2組A

5、ST、ALT、GLB較正常組及模型1組均顯著升高(P＜0.01或P＜0.05)，三甲散組AST水平較模型2組顯著下降(P＜0.01)，較正常組無明顯變化(P＞0.05)，GLB較正常組升高（P＜0.05)，鱉甲片組 AST水平較模型2組顯著下降(P＜0.01)，較正常組、三甲散組無明顯變化(P＞0.05)。
　　模型2組 HA、LN、CⅣ、PCⅢ水平較其余四組均有不同程度的升高(P＜0.01或P＜0.05)，三甲散組PCⅢ、LA水

6、平均較正常組升高(P＜0.01或P＜0.05)，PCⅢ、HA及LN水平較模型2組均下降(P＜0.01或P＜0.05)，鱉甲片組PCⅢ、LA水平均較正常組升高(P＜0.01或P＜0.05)，HA、LN、PCⅢ水平較模型2組均下降(P＜0.01或P＜0.05)，與三甲散組比較，無差異(P＞0.05)。
　　3.微血管密度(MVD)
　　造模各組大鼠MVD均高于正常組(P＜0.01或P＜0.05)，模型2組MVD顯著高于三甲散組及

7、鱉甲片組(P＜0.01)，與模型1組無差異(P＞0.05)，三甲散組MVD顯著低于模型2組大鼠(P＜0.01)，與鱉甲片組比較無差異(P＞0.05)。
　　4.HIF-1α/VEGFA/VEGFR-2及PDGFB/PDGFR-β信號(hào)通路
　　模型1組較正常組VEGFA蛋白表達(dá)上升(P＜0.05)，模型2組較正常組各項(xiàng)蛋白均有不同程度的升高(P＜0.01或P＜0.05)，三甲散組與正常組比較，VEGFA及PDGFR-β表達(dá)均上

8、升(P＜0.05)，HIF-1α表達(dá)下降(P＜0.01)，與模型2組比較，HIF-1α、VEGFR-2及PDGFB表達(dá)均下降(P＜0.05)，與鱉甲片組比較，HIF-1α及VEGFR-2表達(dá)下降(P＜0.05)，鱉甲片組與正常組比較，VEGFA、VEGFR-2與PDGFR-β蛋白表達(dá)均升高(P＜0.05)，與模型2組比較PDGFB表達(dá)下降(P＜0.05)，與三甲散組比較，PDGFB表達(dá)無差異(P＞0.05)。
　　模型2組HIF-

9、1α、VEGFA、VEGFR-2、PDGFB及PDGFR-βmRNA水平均高于正常組(P＜0.01或P＜0.05)，三甲散組HIF-1α、VEGFR-2及PDGFBmRNA水平均低于模型2組(P＜0.01)，與正常組無明顯差異(P＞0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.根據(jù)病理形態(tài)觀察、肝功及肝纖維化指標(biāo)，提示采用豬血清腹腔注射12周能成功復(fù)制大鼠免疫性肝纖維化模型。模型時(shí)間越長(zhǎng)，肝臟纖維化程度越高，且血清肝纖維化指標(biāo)異常越明顯

10、。
　　2.加減三甲散組大鼠血清AST、HA、LN及PCⅢ水平均低于模型2組，提示加減三甲散可改善肝纖維化大鼠肝纖維化指標(biāo)，具有一定的抗肝纖維化效果。
　　3.加減三甲散組大鼠MVD水平顯著低于模型2組大鼠MVD水平，提示加減三甲散可抑制病理性微血管增生，其抗肝臟纖維化的機(jī)制可能與此相關(guān)。
　　4.加減三甲散組大鼠HIF-1α、VEGFR-2、PDGFB蛋白及mRNA的表達(dá)均低于模型2組，提示加減三甲散可抑制肝纖維化大