“治肺”、“治腸”、“肺腸合治法”對腸道菌群失調(diào)合并過敏性哮喘大鼠Th17-Treg平衡機(jī)制影響的比較研究.pdf

1、目的：本研究基于“肺與大腸相表里”相關(guān)臟腑理論，建立“肺腸合病”模型即腸道菌群失調(diào)合并過敏性哮喘動(dòng)物模型，結(jié)合Thl7/Treg平衡機(jī)制在哮喘發(fā)生發(fā)展中至關(guān)重要的作用，對比治肺、治腸、肺腸合治三種治法對腸道菌群失調(diào)合并過敏性哮喘的治療效應(yīng)、以及對Thl7/Treg平衡機(jī)制調(diào)節(jié)作用，這將進(jìn)一步豐富“肺與大腸相表里”臟腑相關(guān)理論的科學(xué)內(nèi)涵，亦為臨床中醫(yī)防治過敏性哮喘提供理論借鑒和思路參考，以期提高臨床療效。
　　方法：選用SPF級Sp

2、rague– Dawley雄性大鼠，按體重進(jìn)行分層設(shè)計(jì)隨機(jī)分組，分為空白組、菌群失調(diào)合并哮喘激發(fā)組（后簡稱模型組）、“桂枝加厚樸杏子湯”治療組（后簡稱治肺組）、“增液承氣湯”治療組（后簡稱治腸組）、“升降散”治療組（后簡稱肺腸合治組），共五組。依據(jù)文獻(xiàn)改良后建立腸道菌群失調(diào)合并過敏性哮喘模型。造模后，從激發(fā)當(dāng)天三個(gè)治療組分別給予桂枝加厚樸杏子湯、增液承氣湯、升降散濃縮液灌胃，空白組和模型組灌生理鹽水，連續(xù)7天。實(shí)驗(yàn)過程中觀察大鼠的一般情

3、況(在外觀、反應(yīng)、毛色、納食、糞便情況等)，哮喘癥狀（煩躁、打噴嚏、咳嗽、腹肌強(qiáng)烈收縮、呼吸急促等)；造模及治療結(jié)束后使用生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)檢測大鼠肺功能，取肺組織、腸組織、支氣管肺泡灌洗液、結(jié)腸中的新鮮糞便等，采用培養(yǎng)法分析糞便菌群，運(yùn)用Q-PCR檢測肺組織Foxp3 mRNA及ROR-γ tmRNA的表達(dá)，利用ELISA檢測血清中IL-4、IL-6、IL-10、IL-17含量及BALF中sIgA、IL-4細(xì)胞因子濃度，以及腸黏膜的sI

4、gA含量。
　　結(jié)果：
　　1、大鼠一般情況：模型組、治肺組、治腸組、肺腸合治組的大鼠在霧化過程中均出現(xiàn)不同程度的煩躁不安或者安靜少動(dòng)、呼吸頻率加快加深、點(diǎn)頭樣呼吸、弓背直立、前肢縮抬，二便失禁等哮喘速發(fā)相反應(yīng)表現(xiàn)；正常組大鼠則活動(dòng)自如，無上述表現(xiàn)；除空白組外，模型組、治肺組、治腸組、肺腸合治組均不同程度出現(xiàn)懶動(dòng)、少食，倦怠蜷縮，被毛蓬松無澤，反應(yīng)遲緩，體重減輕，攝食量減少，大便次數(shù)增多或減少，便質(zhì)稀溏，偶有便秘或排便困難。

5、
　　2、肺組織及腸組織形態(tài)學(xué)結(jié)果：與空白組比較，模型組肺組織血管壁周圍及肺間質(zhì)炎性細(xì)胞浸潤嚴(yán)重，經(jīng)過治療后，病損情況有不同程度的改變，其中以治腸組的肺組織改善最為顯著，其次為肺腸合治組；而模型組的結(jié)腸組織較空白組肌層、漿膜層炎細(xì)胞浸潤均不同程度損害，治療3組對結(jié)腸組織病損有所改善，其中治肺組比病理模型組浸潤程度減輕最為顯著，其次則為肺腸合治組。
　　3、肺部支氣管炎癥變化：治肺組中BALF中白細(xì)胞總數(shù)和EOS百分比顯著降低

6、，EOS雖也有降低趨勢，但不具有顯著性差異；BALF中IL-4顯著降低。治腸組中BALF中EOS和EOS百分比明顯降低，具有顯著性差異，白細(xì)胞總數(shù)有降低趨勢，但不具統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；BALF中IL-4顯著降低。肺腸合治組中BALF中白細(xì)胞總數(shù)和EOS含量顯著降低，EOS百分比雖也有降低趨勢，但不具有顯著性差異；BALF中IL-4顯著降低。
　　4、肺功能變化：治肺組哮喘大鼠的呼吸頻率明顯低于模型組，更接近于空白組水平，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。氣

7、道高反應(yīng)性雖低于模型組，但不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。治腸組哮喘大鼠的呼吸頻率和氣道高反應(yīng)性均明顯低于模型組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。，肺腸合治組哮喘大鼠的呼吸頻率和氣道高反應(yīng)性均明顯低于模型組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　5、腸道菌群變化：治肺組中大腸桿菌的數(shù)量較模型組明顯降低，使之更趨向于空白組水平，乳酸桿菌和雙歧桿菌的數(shù)量均顯著升高，白色念珠菌顯著減少，均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。腸球菌較模型組減少，但不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。治腸組中乳酸桿菌和雙歧桿菌的數(shù)量均顯著

8、升高，白色念珠菌顯著減少，均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。腸球菌和大腸桿菌較模型組變化不大，不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。肺腸合治組中大腸桿菌的數(shù)量較模型組明顯降低，乳酸桿菌和雙歧桿菌的數(shù)量均顯著升高，白色念珠菌顯著減少，均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。腸球菌較模型組有減少趨勢，但不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　6、腸粘膜sIgA變化：治肺組較模型組sIgA呈增加趨勢，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。治腸組較模型組sIgA呈顯著性增加，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。肺腸合治組較模型組sIgA顯著增加，具有統(tǒng)計(jì)

9、學(xué)意義。
　　7、血清中IL-4、IL-6、IL-10、IL-17含量的變化：治肺、治腸、肺腸合治組均顯著升高了血清中IL-10的水平，以治腸組最為明顯；治肺、肺腸合治組均降低了血清中IL-17的水平，以治肺組更明顯，治腸組雖表現(xiàn)出對血清中IL-17的水平有降低趨勢，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；治肺、治腸、肺腸合治組均降低了血清中IL-6的水平，以治腸組較為明顯。治肺、治腸、肺腸合治組均不同程度升高了血清中TGF-β的水平，以治肺組升高最明顯

10、，肺腸合治組升高最不明顯。
　　8、PCR法檢測肺組織FoxP3mRNA、RORγ tmRNA表達(dá)的變化：治肺、治腸、肺腸合治組均表現(xiàn)出FoxP3mRNA水平的升高和RORγ tmRNA水平的降低，F(xiàn)oxP3mRNA水平的升高以肺腸合治組最為明顯，RORγ tmRNA水平的降低以治肺組最為明顯。
　　結(jié)論：
　　1、治肺、治腸、肺腸合治三種治法對腸道菌群失調(diào)合并過敏性哮喘大鼠均表現(xiàn)出治療作用。治肺法代表方“桂枝加厚樸杏

11、子湯”能顯著改善模型大鼠腸道菌群變化。治腸法代表方“增液承氣湯”能顯著改善肺部炎癥和肺功能狀況。肺腸合治法能同時(shí)改善肺部炎癥、肺功能、腸道菌群和腸粘膜sIgA的水平變化。本結(jié)論體現(xiàn)了“治肺法可以治腸”、“治腸法可以治肺”、“肺腸合治法可以肺腸同治”，這與“肺與大腸相表里”臟腑理論的“肺病治腸”、“腸病治肺”、“肺腸合病則肺腸合治”是相吻合的。
　　2、治肺、治腸、肺腸合治三種治法對腸道菌群失調(diào)合并過敏性哮喘大鼠Th17/Treg平

12、衡機(jī)制相關(guān)細(xì)胞因子和基因均表現(xiàn)出良性調(diào)節(jié)作用。但三種治法的作用機(jī)制各不相同。其中治腸法可能升高了血清中IL-10水平、降低血清中IL-6水平而起到良性調(diào)節(jié)Th17/Treg平衡機(jī)制的效應(yīng)；治肺法可能通過降低血清中IL-17水平、升高血清中TGF-β水平和降低肺組織RORγ tmRNA水平而起到良性調(diào)節(jié)Th17/Treg平衡機(jī)制的效應(yīng)；肺腸合治組可能通過升高肺組織FoxP3mRNA表達(dá)的水平而起到良性調(diào)節(jié)Th17/Treg平衡機(jī)制的效應(yīng)。