重組人促紅細(xì)胞生成素通過PI3K-Akt通路影響早產(chǎn)兒腦損傷模型血管新生反應(yīng)的研究.pdf

1、目的:
　　1.探討rh-EPO干預(yù)早產(chǎn)兒腦損傷模型是否通過激活PI3K/Akt信號通路影響CD34蛋白以及CD34+細(xì)胞計數(shù)。
　　2.探討rh-EPO干預(yù)早產(chǎn)兒腦損傷模型是否通過激活PI3K/Akt信號通路影響VEGFR2蛋白、VEGF以及Ang-1的基因表達(dá)變化。
　　方法:
　　取生后第5日的SD幼鼠，隨機(jī)分為五大組（每亞組6只），建立早產(chǎn)兒腦損傷模型并給予相應(yīng)的干預(yù):(1)假手術(shù)組(Ⅰ):僅游離右側(cè)頸總

2、動脈后縫合皮膚;(2)缺氧缺血+生理鹽水組(Ⅱ):游離右側(cè)頸總動脈并結(jié)扎后縫合皮膚，返籠恢復(fù)1小時后，腹腔注射生理鹽水后缺氧2小時，缺氧環(huán)境取出后經(jīng)腦定位儀于右側(cè)腦室注射生理鹽水;(3)缺氧缺血+抑制劑組(Ⅲ):游離右側(cè)頸總動脈并結(jié)扎后縫合皮膚，返籠恢復(fù)1小時后，腹腔注射生理鹽水后缺氧2小時，缺氧環(huán)境取出后經(jīng)腦定位儀于右側(cè)腦室注射PI3K/Akt信號通路抑制劑LY294002;(4)缺氧缺血+rh-EPO組(Ⅳ):游離右側(cè)頸總動脈并結(jié)扎

3、后縫合皮膚，返籠恢復(fù)1小時后，腹腔注射rh-EPO后缺氧2小時，缺氧環(huán)境取出后經(jīng)腦定位儀于右側(cè)腦室注射生理鹽水;(5)缺氧缺血+rh-EPO+抑制劑(Ⅴ):游離右側(cè)頸總動脈并結(jié)扎后縫合皮膚，返籠恢復(fù)1小時后，腹腔注射rh-EPO后缺氧2小時，缺氧環(huán)境取出后經(jīng)腦定位儀于右側(cè)腦室注射PI3K/Akt信號通路抑制劑LY294002。90只幼鼠分別于術(shù)后15、30、90min取右側(cè)大腦行Western blot半定量檢測p-Akt。另外90只幼

4、鼠于術(shù)后2天取右側(cè)大腦Western blot檢測CD34、VEGFR2蛋白，同時行免疫熒光檢測CD34+細(xì)胞計數(shù)，qRT-PCR檢測VEGF、Ang-1 mRNA水平。
　　結(jié)果:
　　1.在術(shù)后15分鐘組，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ的p-Akt比Ⅰ稍高(P＜0.05);Ⅳ、Ⅴ的p-Akt高于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ(P＜0.05)。在術(shù)后30、90分鐘組，Ⅳ組的p-Akt蛋白表達(dá)量明顯高于其他四組(P＜0.05);Ⅱ組的p-Akt蛋白表達(dá)量稍高于

5、Ⅰ組（P＜0.05）。組Ⅳ的p-Akt在術(shù)后30min高于術(shù)后15min(P＜0.05)。
　　2.在術(shù)后2天，CD34的蛋白表達(dá)量以及CD34+細(xì)胞計數(shù)在Ⅳ組均明顯高于其他四組(P＜0.05);Ⅱ組的稍高于Ⅰ組(P＜0.05);組Ⅰ與組Ⅲ相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。VEGFR2蛋白表達(dá)量在術(shù)后2天的變化趨勢與CD34蛋白變化趨勢一致。VEGF、Ang-1的基因表達(dá)水平在Ⅳ組均明顯高于其他四組(P＜0.05);Ⅱ組的稍高于Ⅰ組（P＜0

6、.05）;組Ⅰ與組Ⅲ相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）;組Ⅴ介于組Ⅱ與組Ⅳ之間（P＜0.05）。
　　結(jié)論:
　　1.外源性重組人促紅細(xì)胞生成素在腦損傷后30分鐘內(nèi)使Akt的磷酸化作用逐漸增強(qiáng)。
　　2.缺氧缺血損傷可以誘導(dǎo)Akt部分激活，參與促進(jìn)早產(chǎn)兒腦損傷模型損傷腦區(qū)CD34+細(xì)胞計數(shù)、CD34蛋白、VEGFR2蛋白、VEGF以及Ang-1基因表達(dá)增加，但影響較小。
　　3.外源性rh-EPO可以通過激活