肝纖維化進程中KLF4與Notch通路關系的研究.pdf

1、目的:肝星狀細胞（HSCs）活化并轉分化為肌成纖維樣細胞的過程在肝纖維化過程中起重要作用，抑制其轉分化是目前防治肝纖維化的研究熱點。HSC轉分化過程類似上皮間質轉化(EMT)過程，KLF4可通過抑制TGF-β/Smad3/Snail和Notch信號通路，抑制多種組織類型細胞EMT，然而KLF4在HSC轉分化中的作用尚未報道。
　　有研究已證明Notch通路能夠激活肝星狀細胞，促進肝纖維化的進程，本實驗著重研究KLF4抑制Notch

2、通路的激活作用，并進一步為證明KLF4在肝星狀細胞活化過程中的作用提供依據，為治療肝纖維化提供新的研究方向。
　　方法：
　　(1)建立小鼠肝纖維化模型，在不同時期行肝臟組織切片熒光免疫組織化學分析肝纖維化進程中Klf4和Notch通路相關分子的表達指標。提取不同時期小鼠肝纖維化模型的肝組織RNA行PCR檢測，了解在纖維化進程中Klf4與Notch通路表達蛋白的關系。
　　(2)培養(yǎng)人肝星狀細胞LX-2細胞，添加Not

3、ch通路的激活劑TGF-β1[1]（轉化生長因子-β1）和抑制劑DAPT[2]（一種γ-分泌酶抑制劑）后行western-blot檢測，了解Notch通路表達蛋白的變化與klf4的關系。最后通過細胞瞬轉上調klf4后行PCR技術檢測Klf4的變化與Notch通路表達蛋白的關系。
　　結果：
　　(1)肝纖維化模型中隨著肝組織纖維化的加重，Klf4在組織中的表達量逐漸下降，而Notch通路相關分子的表達量逐漸上升。肝組織RNA

4、的PCR檢測也證實了該結果。
　　(2)原代細胞提取后檢測在不同濃度DAPT的刺激下，KLF4的表達量是上升的（11.18±7.64，p<0.05）。添加Notch通路激活劑TGF-β1后，LX-2細胞klf4的表達量減少，而添加Notch通路抑制劑DAPT后，LX-2細胞Klf4的表達量有所升高。通過瞬轉上調klf4的LX-2細胞中，Jagged-1表達量較對照組有所上升，Notch-2表達量較對照組有所下降（p<0.05）。<