2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、第一部分:孕期酒精暴露對(duì)胎鼠心臟發(fā)育相關(guān)核心轉(zhuǎn)錄因子組蛋白乙酰化修飾的影響
  目的:
  探討孕期酒精暴露對(duì)HATs和HDACs活性及心臟核心轉(zhuǎn)錄因子GATA4、MEF2C、NKX2.5、TBX5的組蛋白乙酰化修飾狀態(tài)的影響。
  方法:
  受孕ED8.5的昆明小鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組和酒精組,酒精組于ED8.5給予56%酒精(5mg/kg·d)連續(xù)灌胃1周,空白對(duì)照組給予等量生理鹽水灌胃,收集ED14.5和E

2、D16.5胎鼠心臟及PND0.5和PND7新生鼠心臟進(jìn)行如下檢測(cè):
  (1)比色法檢測(cè)HATs和HDACs的活性;
 ?。?)Western blot檢測(cè)心臟組織中組蛋白H3AcK9及ac-H3的乙?;?;
  (3)ChIP-Q-PCR檢測(cè)心臟核心轉(zhuǎn)錄因子GATA4、MEF2C、NKX2.5、TBX5啟動(dòng)子區(qū)域組蛋白ac-H3、H3AcK9乙酰化水平;
 ?。?)運(yùn)用頂空氣相色譜法檢測(cè)孕鼠血液酒精濃度,并觀

3、察酒精相關(guān)副作用。
  結(jié)果:
  (1)以5mg/kg劑量酒精灌胃孕鼠40分鐘后,其血液酒精濃度達(dá)到147.5mg/100ml,且該劑量酒精所導(dǎo)致的流產(chǎn)、死胎及腸脹氣的發(fā)生率約為15%。隨著酒精劑量的增加其血液酒精濃度及相關(guān)副作用的發(fā)生率也逐漸增加。
 ?。?)比色法結(jié)果顯示在胎鼠心臟發(fā)育的ED14.5、ED16.5、PND0.5酒精可以提高胎鼠及新生鼠心肌組織中HATs活性,與空白對(duì)照組相比差異顯著(P<0.05)

4、,而對(duì)心肌組織中HDACs活性無(wú)明顯影響,與空白對(duì)照組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
 ?。?)Western blot結(jié)果顯示孕期酒精暴露可以顯著提高胎鼠及新生鼠心肌組織中組蛋白ac-H3及H3AcK9乙?;剑≒<0.05)。
 ?。?)ChIP-Q-PCR結(jié)果顯示孕期酒精暴露可以顯著提高胎鼠和新生鼠心臟核心轉(zhuǎn)錄因子GATA4、MEF2C、NKX2.5、TBX5啟動(dòng)子區(qū)域組蛋白ac-H3和H3AcK9乙?;剑≒

5、<0.05)。
  結(jié)論:
 ?。?)孕期酒精暴露可以選擇性地提高胎鼠及新生鼠心肌組織中HATs活性,而對(duì)HDACs活性無(wú)顯著影響。
 ?。?)孕期酒精暴露可以顯著提高心肌組織中組蛋白ac-H3和H3AcK9乙?;健?br> ?。?)孕期酒精暴露可導(dǎo)致心臟核心轉(zhuǎn)錄因子GATA4、MEF2C、NKX2.5、TBX5啟動(dòng)子區(qū)域組蛋白ac-H3和H3AcK9高乙酰化狀態(tài)。
  第二部分:組蛋白乙?;笇?duì)心臟發(fā)育相關(guān)

6、轉(zhuǎn)錄因子的組蛋白乙?;{(diào)控作用
  目的:探討HATs對(duì)心臟核心轉(zhuǎn)錄因子GATA4、NKX2.5、MEF2C和TBX5啟動(dòng)子區(qū)域組蛋白乙酰化調(diào)控作用。同時(shí)揭示酒精暴露所致的組蛋白高乙?;瘜?duì)心臟核心轉(zhuǎn)錄因子GATA4、NKX2.5、MEF2C和TBX5轉(zhuǎn)錄活性的影響。
  方法:
 ?。?)選取正常ED14.5胎鼠為研究對(duì)象,針對(duì)心臟核心轉(zhuǎn)錄因子GATA4、NKX2.5、MEF2C和TBX5啟動(dòng)子區(qū)域前1000bp設(shè)計(jì)特

7、異性引物,分別以ChIP級(jí)抗p300、CBP、PCAF、SRC1、GCN5抗體做ChIP-PCR檢測(cè)HATs各個(gè)亞型對(duì)上述心臟核心轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控作用。
 ?。?)收集ED14.5、ED16.5胎鼠心臟及PND0.5、PND7新生鼠心臟;實(shí)驗(yàn)設(shè)立空白對(duì)照組和酒精暴露組,針對(duì)心臟核心轉(zhuǎn)錄因子GATA4、NKX2.5、MEF2C和TBX5啟動(dòng)子區(qū)域前1000bp設(shè)計(jì)特異性引物,分別以ChIP級(jí)抗p300、CBP、PCAF、SRC1、GC

8、N5抗體行ChIP-Q-PCR檢測(cè)酒精對(duì)上述心臟核心轉(zhuǎn)錄因子啟動(dòng)子區(qū)域HATs各個(gè)亞型結(jié)合量的影響。
 ?。?)收集ED14.5、ED16.5胎鼠心臟及PND0.5、PND7新生鼠心臟;實(shí)驗(yàn)設(shè)立空白對(duì)照組和酒精暴露組,針對(duì)心臟核心轉(zhuǎn)錄因子GATA4、NKX2.5、MEF2C和TBX5 CDS核心編碼區(qū)設(shè)計(jì)特異性引物,運(yùn)用實(shí)時(shí)定量RT-PCR檢測(cè)上述心臟核心轉(zhuǎn)錄因子mRNA表達(dá)水平。
  結(jié)果:
 ?。?)ChIP-PC

9、R結(jié)果顯示HATs亞型p300、CBP、PCAF、SRC1及GCN5均能結(jié)合到心臟核心轉(zhuǎn)錄因子GATA4、MEF2C、NKX2.5及TBX5啟動(dòng)子區(qū)域。
 ?。?)酒精暴露組HATs亞型p300、CBP、PCAF、SRC1在心臟核心轉(zhuǎn)錄因子GATA4、MEF2C、NKX2.5及TBX5啟動(dòng)子區(qū)域的結(jié)合量顯著增高,與空白對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),而HATs亞型GCN5在上述轉(zhuǎn)錄因子啟動(dòng)子區(qū)域的結(jié)合量酒精組與空白對(duì)照組比

10、較無(wú)顯著差異(P>0.05)。
 ?。?)胎鼠心臟核心轉(zhuǎn)錄因子GATA4、MEF2C、NKX2.5及TBX5的mRNA表達(dá)水平在酒精暴露組高于空白對(duì)照組,且在ED14.5、ED16.5胎鼠心肌組織中GATA4 mRNA及MEF2C mRNA表達(dá)水平酒精組與空白對(duì)照組相比差異顯著(P<0.05);NKX2.5 mRNA表達(dá)量在ED14.5、ED16.5及PND0.5酒精組與空白對(duì)照組相比差異顯著(P<0.05);TBX5 mRNA表

11、達(dá)量在ED14.5酒精組顯著高于空白對(duì)照組(P<0.05)。
  結(jié)論:
  (1)生理狀態(tài)下HATs亞型p300、CBP、PCAF、SRC1及GCN5均可以結(jié)合到心臟核心轉(zhuǎn)錄因子GATA4、MEF2C、NKX2.5及TBX5啟動(dòng)子區(qū)域,參與上述轉(zhuǎn)錄因子組蛋白乙酰化修飾調(diào)控。
  (2)孕期酒精暴露可以顯著提高HATs亞型p300、CBP、PCAF、SRC1在心臟核心轉(zhuǎn)錄因子GATA4、MEF2C、NKX2.5及TBX

12、5啟動(dòng)子區(qū)域的結(jié)合量。
 ?。?)孕期酒精暴露可以顯著提高胎鼠心臟核心轉(zhuǎn)錄因子GATA4、MEF2C、NKX2.5及TBX5的轉(zhuǎn)錄活性。
  第三部分:漆樹(shù)酸抑制組蛋白乙?;抡{(diào)酒精誘導(dǎo)的心臟發(fā)育相關(guān)基因的過(guò)表達(dá)
  目的:探討HATs抑制劑漆樹(shù)酸通過(guò)抑制組蛋白乙?;揎棤顟B(tài)從而下調(diào)酒精誘導(dǎo)的心臟核心轉(zhuǎn)錄因子GATA4、TBX5及心臟發(fā)育相關(guān)基因α-MHC、Cx43、cTnT、α-actin過(guò)表達(dá)的作用。
  方

13、法:
  選取昆明小鼠為研究對(duì)象,將ED8.5的孕鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組、空白對(duì)照+DMSO組、酒精組、酒精+DMSO組,酒精+DMSO+漆樹(shù)酸組、空白對(duì)照+DMSO+漆樹(shù)酸組。酒精組給予56%酒精(5mg/kg·d)連續(xù)灌胃1周,空白對(duì)照組給予等量生理鹽水灌胃,空白對(duì)照+ DMSO組給予等量生理鹽水灌胃的基礎(chǔ)上再給予等量DMSO腹腔注射,酒精+DMSO+漆樹(shù)酸組給予酒精(5mg/kg·d)灌胃,同時(shí)給予DMSO溶解的漆樹(shù)酸腹腔注射

14、(5mg/kg·d);在ED14.5收集胎鼠心臟進(jìn)行以下檢測(cè):
 ?。?)分別以抗HATs亞型p300、PCAF、SRC1抗體及抗H3AcK9抗體行染色質(zhì)免疫共沉淀,針對(duì)心臟核心轉(zhuǎn)錄因子GATA4、TBX5啟動(dòng)子區(qū)域設(shè)計(jì)特異性引物,運(yùn)用Real-Time PCR擴(kuò)增抗p300、PCAF、SRC1及H3AcK9抗體募集到的DNA片段,檢測(cè)p300、PCAF、SRC1在上述心臟核心轉(zhuǎn)錄因子啟動(dòng)子區(qū)域的結(jié)合量及組蛋白H3AcK9乙?;?/p>

15、平。
  (2)實(shí)時(shí)定量RT-PCR檢測(cè)心臟核心轉(zhuǎn)錄因子GATA4、TBX5及心臟發(fā)育相關(guān)基因α-MHC、Cx43、cTnT、α-actin的 mRNA表達(dá)水平。
 ?。?)Western blot檢測(cè)組蛋白H3AcK9乙酰化水平及心臟發(fā)育相關(guān)基因α-MHC、Cx43、cTnT、α-actin的蛋白表達(dá)水平。
  結(jié)果:
 ?。?)Western blot結(jié)果顯示酒精暴露組胎鼠心肌組織組蛋白H3AcK9乙酰化水平

16、顯著高于空白對(duì)照組(P<0.05),ChIP-Q-PCR結(jié)果表明心臟核心轉(zhuǎn)錄因子GATA4、TBX5啟動(dòng)子區(qū)域組蛋白H3AcK9乙酰化水平在酒精暴露組顯著高于空白對(duì)照組(P<0.05),而漆樹(shù)酸能夠顯著抑制酒精所致的組蛋白高乙?;≒<0.05)。
  (2)ChIP-Q-PCR結(jié)果表明心臟核心轉(zhuǎn)錄因子GATA4、TBX5啟動(dòng)子區(qū)域p300、PCAF、SRC1的結(jié)合量在酒精暴露組顯著高于空白對(duì)照組(P<0.05),漆樹(shù)酸能夠顯著降

17、低p300和PCAF在心臟核心轉(zhuǎn)錄因子GATA4、TBX5啟動(dòng)子區(qū)域的結(jié)合量(P<0.05);但漆樹(shù)酸并不能降低SRC1在心臟核心轉(zhuǎn)錄因子GATA4、TBX5啟動(dòng)子區(qū)域的結(jié)合量(P>0.05)。
  (3)實(shí)時(shí)定量RT-PCR結(jié)果顯示酒精暴露可以顯著提高心臟核心轉(zhuǎn)錄因子GATA4、TBX5及心臟發(fā)育相關(guān)基因α-MHC、Cx43、cTnT mRNA表達(dá)水平(P<0.05),但酒精暴露并不能提高α-actin的mRNA表達(dá)水平(P>0

18、.05);漆樹(shù)酸能夠顯著下調(diào)酒精暴露所致的GATA4、TBX5、α-MHC、Cx43、cTnT的mRNA過(guò)表達(dá)(P<0.05)。
 ?。?)Western blot結(jié)果顯示孕期酒精暴露可以顯著提高胎鼠心臟發(fā)育相關(guān)基因α-MHC、Cx43、cTnT蛋白表達(dá)水平(P<0.05),但酒精暴露并不能提高α-actin的蛋白表達(dá)水平(P>0.05)。而漆樹(shù)酸能夠顯著下調(diào)酒精暴露所致的α-MHC、Cx43、cTnT的蛋白過(guò)表達(dá)(P<0.05)

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