枯草桿菌和渾球紅細(xì)菌ALAD和釀酒酵母VMA4VMA10的結(jié)構(gòu)生物學(xué)研究.pdf

1、(Ⅰ)5-氨基乙酰丙酸脫水酶(5-aminolaevulinic acid dehydratase，ALAD)在四吡咯的生物合成中發(fā)揮關(guān)鍵的作用。它將兩個(gè)5-氨基乙酰丙酸(5-aminolaevulinicacid，ALA)脫水縮合成膽色素原。在接下來的反應(yīng)中，膽色素原脫乙酰酶和尿卟、啉原合成酶催化四個(gè)膽色素原形成一個(gè)環(huán)狀的四吡咯尿卟啉原Ⅲ。這些反應(yīng)是多種重要金屬輔基基團(tuán)例如血紅素、葉綠素和維生素B12生物合成途徑中的相同步驟。

2、　　 在本論文中，我們構(gòu)建了枯草桿菌源和渾球紅細(xì)菌源的5-氨基乙酰丙酸脫水酶的表達(dá)載體，并純化了兩個(gè)蛋白。使用懸滴氣相擴(kuò)散法得到了兩個(gè)蛋白的晶體。在上海同步輻射光源收集到枯草桿菌源蛋白最高分辨率2.7A的衍射數(shù)據(jù)。晶體的空間群是P42212，晶胞參數(shù)是a=b=129.389，c=111.445。初步分析一個(gè)晶體學(xué)不對稱單位含有三個(gè)蛋白質(zhì)分子，對應(yīng)的Matthews Coefficient是2.16 A3/Da，溶劑含量是43.08％。

3、
　　 (Ⅱ)V型ATP酶(Vacuolar ATPase)是負(fù)責(zé)調(diào)控胞內(nèi)細(xì)胞器內(nèi)外質(zhì)子平衡的關(guān)鍵元件。它依賴于ATP水解產(chǎn)生的能量推動(dòng)質(zhì)子在膜中的運(yùn)輸。V型ATP全酶主要由整合在膜上的質(zhì)子轉(zhuǎn)運(yùn)通道V0結(jié)構(gòu)域和處于胞質(zhì)中的ATP結(jié)合水解元件V1結(jié)構(gòu)域所組成，它還包括了將兩個(gè)大結(jié)構(gòu)域相銜接的可以轉(zhuǎn)動(dòng)的中央桿和起固定作用的外周桿。
　　 本研究中，我們表達(dá)純化了釀酒酵V源V型ATP酶外周桿的關(guān)鍵部分:E亞基和G亞基組成的亞復(fù)