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文檔簡介
1、肝癌是當(dāng)今全世界發(fā)病率及致死率最高的癌癥之一。發(fā)展新型高效、快速的腫瘤標(biāo)志物篩選方法,以及開發(fā)對腫瘤病理組織具有高特異性、高靈敏度并且化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定的分子識(shí)別探針對于臨床腫瘤診斷、分類及判斷預(yù)后等具有非常重要意義。
近年來,基于protein-SELEX或者cell-SELEX技術(shù)篩選得到的核酸適配體作為一種新發(fā)展起來的識(shí)別分子在包括癌癥研究的許多領(lǐng)域獲得了廣泛的應(yīng)用。但是protein-SELEX方法的篩選靶標(biāo)為純化蛋白,而c
2、ell-SELEX技術(shù)以體外培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞系為篩選靶標(biāo),這些篩選目標(biāo)物都無法真正模擬體內(nèi)腫瘤的實(shí)際發(fā)生發(fā)展模式,忽略了腫瘤形成過程中會(huì)受到體內(nèi)包括血管微環(huán)境和細(xì)胞外周基質(zhì)等的多種因素影響,這使得基于cell-SELEX篩選得到的核酸適配體一般只能識(shí)別體外培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞系,難以真正實(shí)現(xiàn)對腫瘤臨床病理組織的檢測和診斷,嚴(yán)重限制了核酸適配體在腫瘤臨床領(lǐng)域的研究和應(yīng)用。而tissue-SELEX技術(shù)以臨床腫瘤組織為篩選靶標(biāo),能獲得真正識(shí)別臨床腫
3、瘤病理組織的核酸適配體探針,在腫瘤標(biāo)志物的發(fā)現(xiàn)、臨床診斷和分型研究中展示出了良好的潛力,但是相關(guān)研究目前還開展得太少,有待進(jìn)一步推進(jìn)。
本論文采用tissue-SELEX技術(shù),以臨床肝癌組織切片為樣本,成功篩選得到能區(qū)分肝癌組織與正常肝組織的核酸適配體,并對核酸適配體與靶標(biāo)的結(jié)合性能進(jìn)行了分析研究。
(1)基于tissue-SELEX技術(shù),以臨床肝癌組織切片為靶標(biāo),癌旁正常肝組織為對照進(jìn)行篩選。此外,我們還對篩選方法
4、進(jìn)行了修改,利用前人篩選得到的核酸適配體BC15對組織中的相關(guān)位點(diǎn)進(jìn)行了封閉,希望篩選得到的核酸適配體結(jié)合一個(gè)新位點(diǎn)。經(jīng)過11輪不斷增加篩選壓力的反復(fù)篩選過程,成功鑒定出一條能區(qū)分肝癌組織與正常肝組織的核酸適配體SW1。
(2)用固定的癌細(xì)胞系為模型,通過熒光共定位表征發(fā)現(xiàn)核酸適配體SW1的靶分子亞細(xì)胞定位在細(xì)胞核,而且不是核酸,可能是一種核酸結(jié)合蛋白;利用流式細(xì)胞術(shù),我們測定出SW1對肝癌SMMC-7721細(xì)胞的解離常數(shù)在納
5、摩爾級(jí)別,展現(xiàn)出較強(qiáng)的親和力;競爭實(shí)驗(yàn)表明我們篩選得到的核酸適配體SW1與其他研究組篩選得到的核酸適配體BC15的識(shí)別位點(diǎn)不相同。此外,通過組織芯片考察,核酸適配體對臨床肝癌組織的識(shí)別率達(dá)到了72.7%,且對來源于多種器官的腫瘤組織都有較強(qiáng)的結(jié)合能力。
綜合以上分析結(jié)果,我們篩選得到的核酸適配體SW1能區(qū)分肝癌組織與正常肝組織,對于肝癌的臨床篩查和診斷有一定的輔助指導(dǎo)價(jià)值,而且由于SW1的靶分子為一種亞細(xì)胞定位在細(xì)胞核的蛋白質(zhì)
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