磁性聚乙撐亞胺的制備和細(xì)胞轉(zhuǎn)染的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　用超順磁性氧化鐵納米粒修飾聚乙撐亞胺，對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行表征，探討超順磁性聚乙撐亞胺攜帶基因的能力、轉(zhuǎn)染細(xì)胞的效率及對(duì)細(xì)胞活性的影響。
　　方法：
　　1.聚乙撐亞胺與超順磁性Fe3O4納米粒按一定比例振蕩孵育后配制成磁性聚乙撐亞胺，并對(duì)其原子排布、粒徑大小、Zeta電位等進(jìn)行表征；pAd-Track質(zhì)粒通過(guò)化學(xué)轉(zhuǎn)化法導(dǎo)入感受態(tài)大腸桿菌內(nèi)并進(jìn)行擴(kuò)增和提取，將磁性聚乙撐亞胺與質(zhì)粒按不同的比例進(jìn)行結(jié)合，通過(guò)凝膠電泳探索

2、二者最佳結(jié)合比例，并用原子力顯微鏡對(duì)復(fù)合產(chǎn)物的原子排布進(jìn)行描述，Zeta電位檢測(cè)復(fù)合產(chǎn)物攜帶電荷情況。
　　2.將293細(xì)胞根據(jù)不同的轉(zhuǎn)染材料進(jìn)行分組：
　　1）磁性聚乙撐亞胺+pAd-Track；
　　2）非磁性聚乙撐亞胺+pAd-Track；
　　3）GoldenTransfer+pAd-Track；
　　4）PolyMAG+pAd-Track，每組分別設(shè)置有磁場(chǎng)和無(wú)磁場(chǎng)處理的對(duì)照，倒置熒光顯微鏡下分別

3、于轉(zhuǎn)染后24h、48h、72h觀察各組細(xì)胞熒光表達(dá)情況，流式細(xì)胞儀定量檢測(cè)轉(zhuǎn)染24h后各組載體的轉(zhuǎn)染率；CCK8試劑盒檢測(cè)各組載體對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)活性的影響。
　　結(jié)果：
　　1.（1）四氧化三鐵納米粒呈黑色或灰色粉末狀，粒徑大小為9-11nm（TEM），磁感應(yīng)強(qiáng)度（magnetization）>45 emu/g；磁性聚乙撐亞胺；原子力顯微鏡檢測(cè)結(jié)果提示：磁性Fe3O4納米粒上接了一個(gè)18個(gè)碳原子的碳鏈，再用N-羥基硫代琥珀酰亞胺

4、修飾，而聚乙撐亞胺通過(guò)氨基與磁性Fe3O4納米上的N-羥基硫代琥珀酰亞胺結(jié)合，形成磁性聚乙撐亞胺。磁性聚乙撐亞胺粒徑大小約10~30nm，攜帶正電荷約+50mV；
　?。?）凝膠電泳結(jié)果顯示磁性聚乙撐亞胺的比例越高，結(jié)合的質(zhì)粒越多，當(dāng)二者體積：質(zhì)量比達(dá)10:1時(shí)，磁性聚乙撐亞胺能夠完全結(jié)合質(zhì)粒，原子力顯微鏡提示磁性聚乙撐亞胺的結(jié)構(gòu)結(jié)尾有一個(gè)氨基連接了數(shù)個(gè)五元環(huán)結(jié)構(gòu)，說(shuō)明磁性聚乙撐亞胺通過(guò)氨基與質(zhì)粒結(jié)合,Zeta電位檢測(cè)復(fù)合物帶有正

5、電荷，約+22.5mV。
　　2.（1）轉(zhuǎn)染24小時(shí)，熒光顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)，磁性聚乙撐亞胺及非磁性聚乙撐亞胺組熒光表達(dá)量與商品化的轉(zhuǎn)染試劑GoldenTransferTM-D表達(dá)量相當(dāng)，而磁性轉(zhuǎn)染試劑盒PolyMAG組熒光表達(dá)量相對(duì)較低；轉(zhuǎn)染48小時(shí)磁性及非磁性聚乙撐亞胺組的熒光表達(dá)量明顯增多，而GoldenTransferTM-D組的轉(zhuǎn)染量較前兩組增加量相對(duì)較少，PolyMAG組的熒光亦有少量增加；轉(zhuǎn)染72小時(shí)，磁性聚乙撐亞胺及非

6、磁性聚乙撐亞胺組熒光表達(dá)量相當(dāng)，在幾組中最高，GoldenTransferTM-D組其次，PolyMAG組熒光表達(dá)量最低；
　?。?）流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果提示磁性聚乙撐亞胺與非磁性聚乙撐亞胺的轉(zhuǎn)染率相當(dāng)，均較其他組高（P<0.05），GoldenTransferTM-D組轉(zhuǎn)染率尚可，較PolyMAG組更高，而有外磁場(chǎng)對(duì)各組材料的轉(zhuǎn)染率無(wú)顯著影響；
　　（3）磁性聚乙撐亞胺及非磁性聚乙撐亞胺組的細(xì)胞活性的受影響較小，48h細(xì)胞活

7、性相對(duì)較高，在50％以上，兩組細(xì)胞活性無(wú)明顯差異（P>0.05），而兩種商品化的轉(zhuǎn)染試劑GoldenTransferTM-D和PolyMAG對(duì)細(xì)胞活性影響較大，兩組的細(xì)胞生存率均在10~20%左右。在磁場(chǎng)處理后的細(xì)胞活性與無(wú)磁場(chǎng)處理組相比，細(xì)胞活性無(wú)明顯差異（P>0.05）。
　　結(jié)論：
　　本實(shí)驗(yàn)制備的磁性聚乙撐亞胺粒徑大小10~30nm，分布均勻，攜帶正電荷，能夠有效結(jié)合質(zhì)粒。磁性聚乙撐亞胺對(duì)293細(xì)胞的轉(zhuǎn)染率較高且細(xì)胞