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文檔簡介
1、目的:對比研究朱砂、朱砂安神丸、古方化風(fēng)丹、現(xiàn)代方化風(fēng)丹、氯化汞(HgCl2)、甲基汞(MeHg)對大、小鼠肝、腎轉(zhuǎn)運(yùn)體的影響,為科學(xué)地評價(jià)朱砂及含朱砂的中藥用藥安全性提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
方法:1.小鼠實(shí)驗(yàn):健康成年雄性昆明種小鼠分別等量生理鹽水、朱砂安神丸(1.8g·kg-1,含汞0.17g·kg-1)、朱砂(0.2g·kg-1,含汞0.17 g·kg-1)、高劑量朱砂(2g·kg-1,含汞1.7g·kg-1)、HgS(0.2g
2、·kg-1,含汞0.17 g·kg-1)、HgCl2(0.032 g·kg-1,含汞0.024 g·kg-1)、MeHg(0.026 g·kg-1,含汞0.024 g·kg-1),每天給藥一次,連續(xù)30天,觀察記錄小鼠體重,30天后處死動(dòng)物、取腎臟。雙道原子熒光光度法檢測各組小鼠腎汞蓄積量;RT-PCR法檢測各組小鼠腎臟有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)體1、2、3(Oat1、Oat2、Oat3)、多藥耐藥相關(guān)蛋白2、4(Mrp2、Mrp4)、尿酸轉(zhuǎn)運(yùn)體1
3、(Urat1)、有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)多肽(Oatp4c1)、肉毒堿轉(zhuǎn)運(yùn)體(Octn2)、有機(jī)陽離子轉(zhuǎn)運(yùn)體1、2(Oct1、Oct2)、多藥及毒素?cái)D出蛋白(Mate1)、有機(jī)溶質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)體α、β(Ost-α、Ost-β)基因的表達(dá);免疫組織化學(xué)方法檢測各組小鼠腎臟Mrp4蛋白的表達(dá)。2.大鼠實(shí)驗(yàn):健康成年雄性SD大鼠分為正常組(ig,等量生理鹽水)、古方化風(fēng)丹組(ig,0.42 g·kg-1)、萬勝化風(fēng)丹組(ig,0.42 g·kg-1)、廖元和堂
4、化風(fēng)丹組(ig,0.42 g·kg-1)、去朱砂雄黃化風(fēng)丹組(ig,0.42 g·kg-1)、HgCl2組(ig,0.05 g·kg-1)。每天ig給藥一次,30天后處死動(dòng)物取肝、腎組織。Western blot方法檢測大鼠腎組織Oat1蛋白的表達(dá);免疫組織化學(xué)方法檢測大鼠肝組織ABCG5、Mdr1蛋白的表達(dá)。
結(jié)果:1.小鼠實(shí)驗(yàn):與正常組相比,小鼠腎汞蓄積量在HgCl2組和MeHg組顯著升高(P<0.05); HgCl2組和
5、MeHg組Oat1、Oat2、Oct1、Oct2、Octn2、Mate1、Ost-α、Ost-β基因表達(dá)顯著降低(P<0.05); MeHg組Urat1基因表達(dá)顯著降低(P<0.05); HgCl2組和MeHg組Mrp4基因表達(dá)顯著升高(P<0.05); MeHg組Mrp2基因表達(dá)顯著升高(P<0.05);朱砂安神丸組Oatp4c1基因表達(dá)顯著升高(P<0.05)。HgCl2組小鼠腎Mrp4免疫組織化學(xué)陽性表達(dá)相對積分光密度值比正常組顯
6、著增高(P<0.05)。2.化風(fēng)丹對大鼠肝、腎轉(zhuǎn)運(yùn)體的影響:Western blot結(jié)果表明,HgCl2組大鼠腎組織Oat1蛋白相對表達(dá)量比正常組顯著降低(P<0.05);免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示,HgCl2組大鼠肝組織ABCG5、Mdr1表達(dá)相對積分光密度值比正常組顯著降低(P<0.05)。
結(jié)論:1.以臨床劑量給予大、小鼠朱砂安神丸、化風(fēng)丹及等汞含量朱砂,未造成肝、腎組織轉(zhuǎn)運(yùn)體表達(dá)的明顯改變。2.HgCl2、MeHg易改變大、
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