老年小鼠術(shù)后認知功能障礙與NMDA受體-NF-Kappa B-NNOS信號通路關(guān)系的探討.pdf

1、本文主要從以下兩部分展開論述：
　　第一部分 手術(shù)創(chuàng)傷對老年小鼠POCD行為學影響
　　目的:通過左肝外葉切除術(shù)構(gòu)建C57BL/6老年小鼠術(shù)后認知功能障礙(postoperative cognitive dysfunction or decline，POCD)模型，探索老年小鼠POCD模型的構(gòu)建，以及手術(shù)創(chuàng)傷對老年小鼠術(shù)后認知功能的影響。
　　方法:15月齡健康C57BL/6老年小鼠共80只，按隨機數(shù)組表法分為空白對照

2、組、麻醉組、假手術(shù)組和手術(shù)組。小鼠在術(shù)前5天接受訓練，每天3次，尋找固定隱藏平臺。第6天接受左肝外葉切除術(shù)。術(shù)后第1，3，7天用“空間探索實驗”評價其空間記憶能力，記錄穿臺次數(shù)和目標象限停留時間百分比。
　　結(jié)果:在空間獲得性實驗中，各組C57BL/6老年小鼠學習記憶能力隨著時間的延長顯著提高(P＜0.05)并在第5天趨于穩(wěn)定，且組間沒有差異。Morris水迷宮測試老年小鼠穿臺次數(shù)和目標象限停留百分比結(jié)果顯示:與空白對照組比較，麻

3、醉組無差異，假手術(shù)組（除術(shù)后7d）和手術(shù)組明顯下降(P＜0.05);與假手術(shù)組相比，手術(shù)組在各時間點明顯下降(P＜0.05)。組內(nèi)比較，與術(shù)后1d比較，空白組和麻醉組術(shù)后3d、7d無差異;假手術(shù)組術(shù)后3d、7d逐漸恢復，至術(shù)后7d時間點基本恢復正常(P＜0.05);手術(shù)組術(shù)后3d、7d雖有所恢復，但仍較正常值明顯下降(P＜0.05)。
　　結(jié)論:左肝外葉切除術(shù)能成功建立C57BL/6老年小鼠POCD模型，且空間記憶能力的損傷在肝切

4、除術(shù)老年小鼠中較假手術(shù)老年小鼠重。
　　第二部分 POCD與NMDA受體-NF-Kappa B-nNOS信號通路的關(guān)系
　　實驗一
　　目的:對C57BL/6老年小鼠進行手術(shù)并抑制圍術(shù)期應激因素（鎮(zhèn)痛，鎮(zhèn)靜），研究中樞神經(jīng)POCD過程中NMDA受體-NFκ B-nNOS信號通路的激活。
　　方法:15月齡健康C57BL/6老年小鼠共80只，按隨機數(shù)字表法分為空白對照組、麻醉組、假手術(shù)組和手術(shù)組。觀察內(nèi)容如下:分別

5、于術(shù)后1，3，7d三個時間點，各組分別有8只動物斷頭取腦，ELISA測定左側(cè)腦組織NMDA受體NR2B，nNOS，NF-κ B，NOS以及NO含量測定;右側(cè)腦組織RT-PCR測定突觸素mNRA，PSD-95蛋白mNRA。
　　結(jié)果:檢測結(jié)果顯示，與空白對照組比較，各檢測指標(NMDA受體NR2B，NF-κ B，nNOS，NOS)蛋白水平以及NO含量，麻醉組在術(shù)后各時間點無差異;假手術(shù)組（除外術(shù)后7d時間點）和手術(shù)組在術(shù)后各時間點明

6、顯下降(P＜0.05);與假手術(shù)組比較，各時間點手術(shù)組明顯下降(P＜0.05)。組內(nèi)比較:與術(shù)后1d比較，假手術(shù)組至7d時基本恢復正常(P＜0.05);手術(shù)組則逐漸下降，至7d時降至最低(P＜0.05)。
　　RT-PCR測定老年小鼠腦內(nèi)突觸素mRNA和PSD-95mRNA表達水平發(fā)現(xiàn)，與空白對照組比較，麻醉組在術(shù)后各時間點無差異;假手術(shù)組（除外術(shù)后7d時間點）和手術(shù)組在術(shù)后各時間點明顯下降(P＜0.05);與假手術(shù)組比較，各時間

7、點手術(shù)組明顯下降(P＜0.05)。組內(nèi)比較:與術(shù)后1d比較，假手術(shù)組老年小鼠至7d時基本恢復正常(P＜0.05);手術(shù)組則逐漸下降，至7d時降至最低（P＜0.05）。
　　結(jié)論: C57BL/6老年小鼠在構(gòu)建POCD模型后，腦內(nèi)NMDA受體、NF-κB、nNOS蛋白水平的變化趨勢均呈漸進性下降，且7d為最低值。這與腦內(nèi)與突觸相關(guān)的突觸素mRNA和PSD-95蛋白mRNA表達趨勢相同，因此提示腦內(nèi)NMDA受體、NF-κB、nNOS蛋

8、白水平的變化是引起老年小鼠POCD的可能機制。
　　實驗二
　　目的:對C57BL/6老年小鼠進行手術(shù)，抑制圍術(shù)期應激因素（鎮(zhèn)痛，鎮(zhèn)靜），通過應用NMDA受體激動劑(15mg/kg NMDA)驗證老年小鼠POCD過程中存在NMDA受體-NFκB-nNOS通路的激活。
　　方法:15月齡健康C57BL/6老年小鼠共56只，按隨機數(shù)字表法分為空白對照組、假手術(shù)組和手術(shù)組。腹腔內(nèi)注射NMDA受體激動劑(15mg/kg NMD

9、A)1小時后行手術(shù)。觀察內(nèi)容如下:分別于術(shù)后1，3，7d三個時間點，各組分別有8只動物斷頭取腦，ELISA測定左側(cè)腦組織NMDA受體NR2B，nNOS，NF-κB，NOS以及NO含量測定;右側(cè)腦組織RT-PCR測定突觸素mRNA，PSD-95蛋白mRNA。
　　結(jié)果:檢測結(jié)果顯示，與空白對照組比較，各檢測指標(NMDA受體NR2B、NF-κB、nNOS、NOS)蛋白水平以及NO含量，假手術(shù)組在術(shù)后各時間點無差異;手術(shù)組在術(shù)后各時間

10、點明顯下降(P＜0.05)。手術(shù)組內(nèi):與術(shù)后1d比較，其余時間點明顯下降(P＜0.05)，但術(shù)后7d與3d比較則無差異(P＞0.05)。RT-PCR測定老年小鼠腦內(nèi)突觸素mRNA和PSD-95mRNA表達水平發(fā)現(xiàn)，與空白對照組比較，假手術(shù)組在術(shù)后各時間點（除術(shù)后1d）無差異;手術(shù)組在術(shù)后各時間點明顯下降(P＜0.05)。手術(shù)組內(nèi):與術(shù)后1d比較，其余時間點明顯下降(P＜0.05)，但術(shù)后7d與3d比較則無差異(P＞0.05)。