人免疫缺陷病毒感染對淋巴結(jié)結(jié)構(gòu)和功能的影響.pdf

1、目的:評價(jià)不同人免疫缺陷病毒(Human immunoddficiency virus，HIV)感染階段淋巴結(jié)(Lymph nodes，LNs)纖維化情況以及導(dǎo)致纖維化的可能致病機(jī)制，同時(shí)，探討HIV感染后影響LNs內(nèi)微環(huán)境的趨化因子的改變，以及因HIV感染導(dǎo)致的微生物易位可能對濾泡輔助T細(xì)胞(Tfollicular helpercells，Tfh)功能的影響。
　　方法:第一個(gè)研究選擇HIV感染者43例，分為HIV感染無癥狀組和

2、獲得性免疫缺陷綜合征(Acquired immunodeficiency syndrome，AIDS)組，留取外周淺表LNs活體組織檢查（活檢）組織;另外選擇非HIV感染者12例作為健康對照組，同樣取其外周淺表LNs活檢組織。利用免疫組織化學(xué)方法檢測研究對象LNs中CD4+T淋巴細(xì)胞、Ⅰ型膠原蛋白和白介素(Interleukin，IL)-7定量和分布情況。
　　第二個(gè)研究收集HIV感染者活檢外周淺表LNs32例，其中HIV感染無癥

3、狀者組10例，AIDS組22例。將LNs分為兩部分，一部分4％多聚甲醛固定，石蠟包埋，另一部分研磨淋巴細(xì)胞，分別進(jìn)行免疫組化，流式細(xì)胞檢測的實(shí)驗(yàn)，檢測不同T細(xì)胞亞群中轉(zhuǎn)化生長因子(Transforming growth factor，TGF)-β1的表達(dá)。同時(shí)以不同TGF-β1濃度刺激淋巴系統(tǒng)成纖維細(xì)胞，以高表達(dá)TGF-β1的CD8+T淋巴細(xì)胞與后者共培養(yǎng)，利用Western Blot法和免疫熒光法檢測成纖維細(xì)胞分泌膠原蛋白情況。

4、>　　第三個(gè)研究選取不同HIV感染階段的患者43例，分為HIV感染無癥狀組和AIDS組，利用免疫組織化學(xué)方法檢測其LNs中CCL19、CCL21、CXCL12、CXCL13的分泌及分布情況，另選非HIV感染者淺表LNs活檢標(biāo)本12例為對照。
　　第四個(gè)研究選取非HIV感染者外周淺表LNs共20例，分別以脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)和R848刺激，或者在HIV-1感染同時(shí)以LPS和R848刺激，利用流式細(xì)胞

5、方法檢測Tfh細(xì)胞表達(dá)Ki67、CXCR5和BcL6情況。
　　結(jié)果:第一個(gè)研究中:1.隨著病程進(jìn)展，HIV感染者外周淺表LNs中膠原沉積逐漸增加，AIDS組高于無癥狀組，無癥狀組高于健康對照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;20HIV感染無癥狀者外周淺表LNs中CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)與健康對照組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而AIDS患者則顯著減少;3.HIV感染者外周淺袁LNs中CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)與膠原沉積量呈負(fù)相關(guān)，與外周血中CD4+T淋

6、巴細(xì)胞計(jì)數(shù)呈正相關(guān);4.3組IL-7的表達(dá)水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而AIDS組部分患者LNs中IL-7呈局部聚集性分泌。
　　第二個(gè)研究中:1.在非HIV感染者、HIV感染無癥狀組和AIDS患者LNs內(nèi)大量細(xì)胞表達(dá)TGF-β1，但在感染者LNs中TGF-β1陽性細(xì)胞分布紊亂;2.HIV感染無癥狀組和對照組LNs中調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Regulatory T cells，Tregs)頻數(shù)無明顯差異，但前者LNs中TGF-β1+ Tregs頻

7、數(shù)更高。AIDS患者組Tregs頻數(shù)與其他兩組相比明顯下降，TGF-β1+ Tregs頻數(shù)雖也均較其他兩組偏低，但差異僅與HIV感染無癥狀組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;3.三組中均有一群高表達(dá)TGF-β1的T細(xì)胞，其中以HIV感染無癥狀組頻數(shù)最高，AIDS組次之，對照組最低，在感染者中，這群細(xì)胞的主要組成部分是CD8+T淋巴細(xì)胞，而非感染者則以CD4+T淋巴細(xì)胞為主;4.TGF-β1的致纖維化作用有計(jì)量依賴性，高表達(dá)TGF-β1的CD8+T淋巴細(xì)

8、胞可能是HIV感染后LNs纖維化的重要致病機(jī)制之一;5.與非HIV感染者比，HIV感染無癥狀者與AIDS患者LNs中表達(dá)CD38或PD-1的CD8+T淋巴細(xì)胞頻數(shù)顯著升高，表達(dá)CD127的CD8+T淋巴細(xì)胞顯著減少。兩組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　第三個(gè)研究中:1.HIV感染無癥狀者組與對照組相比，外周淺表LNs內(nèi)僅CCL21表達(dá)偏低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而CCL19、CXCL12及CXCL13差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;2.AIDS組與對

9、照組相比，外周淺表LNs中CCL19、CXCL13表達(dá)升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而CCL21、CXCL12差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與無癥狀組相比，相關(guān)趨化因子表達(dá)均升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;3.HIV感染至AIDS期后，外周淺表LNs中各個(gè)趨化因子的分布沒有明顯的區(qū)域界線。
　　第四個(gè)研究中:1.LPS和R848的刺激可以促使Tfh細(xì)胞擴(kuò)張并高表達(dá)BcL6，雖然R848相對于LPS起效晚，但作用效果更強(qiáng);2.HIV-1感染可顯著下調(diào)Tfh

10、細(xì)胞表達(dá)BcL6，LPS可協(xié)助HIV進(jìn)一步抑制Tfh細(xì)胞BcL6的表達(dá)。因此，HIV本身可能是導(dǎo)致Tfh細(xì)胞功能異常的根本原因，而LPS可以起到協(xié)同作用;3.LPS和R848刺激可導(dǎo)致Tfh細(xì)胞下調(diào)CXCR5表達(dá)，使Tfh細(xì)胞接受CXCL13趨化定位于淋巴濾泡中的能力降低。
　　結(jié)論:HIV感染后外周淺袁LNs中膠原沉積逐漸增加導(dǎo)致結(jié)構(gòu)破壞，可能是CD4+T淋巴細(xì)胞進(jìn)行性減少的一個(gè)重要原因，雖然IL-7有隨病程進(jìn)展而分泌增加的趨勢

11、，但仍不足以彌補(bǔ)LNs結(jié)構(gòu)破壞對CD4+T淋巴細(xì)胞的影響。慢性炎癥所導(dǎo)致的高表達(dá)TGF-β1的CD8+T淋巴細(xì)胞在慢性HIV感染LNs增多，是LNs纖維化的重要致病機(jī)制之一。HIV感染者外周淺袁LNs中相關(guān)趨化因子的改變可能是機(jī)體代償和LNs結(jié)構(gòu)破壞的結(jié)果，而這種變化又進(jìn)一步促進(jìn)了免疫功能的破壞和CD4+T淋巴細(xì)胞的減少。HIV感染后消化道微生物產(chǎn)物的漏入可能刺激了Tfh細(xì)胞的擴(kuò)張，但同時(shí)導(dǎo)致了其功能的受損，而HIV本身可能是導(dǎo)致Tfh